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不同频率电针介导PINK1/Parkin通路治疗STC模型大鼠的机制研究

Mechanism of electroacupuncture with different frequencies in the regulation of PINK1/Parkin pathway ac-tivity in a rat model of slow transit constipation (STC)

摘要目的 探讨不同频率电针介导线粒体自噬相关蛋白(PINK1)/帕金蛋白(Parkin)通路治疗慢传输型便秘(STC)模型大鼠的作用.方法 取34只8周龄雄性健康SD大鼠,采用随机数字表分为正常对照组7只和建模组27只.建模组采用洛哌丁胺混悬液灌胃法制备STC模型大鼠,建模成功后采用随机数字表分为模型对照组,2 Hz、50 Hz电针组和假电针组.2 Hz、50 Hz电针组予以电子针疗仪频率2 Hz、50 Hz,强度10 mA刺激"后三里",假电针组针刺"后三里"但不通电,模型对照组和正常对照组仅固定处理,每天30 min,每天1次,持续14 d.碳素墨汁灌胃法检测肠道推进率;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理改变;免疫荧光共聚焦显微镜观察结肠Cajal间质细胞(ICC)形态;免疫组化及蛋白质免疫印迹(WB)法检测结肠组织原癌基因(C-Kit)、PINK1、Parkin、自噬效应蛋白1(Beclin1)、核孔糖蛋白(p62)、自噬相关蛋白3(LC3)蛋白表达.结果 与模型对照组、假电针组比较,50 Hz电针组、2 Hz电针组增加肠道推进率[(60.63±10.21)%、(55.84±9.04)%比(48.43±7.02)%、(49.60±8.19)%,P<0.05]、ICC数量[(29.78±4.19)个、(20.45±4.37)个比(10.50±2.11)个、(11.02±2.28)个,P<0.05]、免疫荧光积分光密度(IOD)值[(2101.35±320.33)、(1936.04±307.26)比(1615.82±276.33)、(1635.97±281.52),P<0.05]、C-kit蛋白表达[(1.26±0.21)、(0.92±0.17)比(0.45±0.07)、(0.48±0.09),P<0.05]、p62蛋白表达[(1.06±0.19)、(0.87±0.13)比(0.54±0.09)、(0.55±0.10),P<0.05].与模型对照组、假电针组比较,50 Hz电针组、2 Hz电针组降低PINK1蛋白表达[(0.37±0.08)、(0.59±0.11)比(0.85±0.17)、(0.83±0.15),P<0.05]、Parkin蛋白表达[(0.55±0.09)、(0.78±0.12)比(1.02±0.21)、(1.04±0.22),P<0.05]、Beclin1蛋白表达[(0.61±0.11)、(0.90±0.13)比(1.07±0.21)、(1.09±0.23),P<0.05]、LC3蛋白表达[(0.69±0.12)、(0.82±0.15)比(1.14±0.18)、(1.11±0.20),P<0.05].正常对照组大鼠结肠组织、ICC形态均正常,模型对照组和假电针组均呈显著改变,2 Hz电针组和50 Hz电针组均改善,且50 Hz电针组基本接近正常对照组.结论 电针"后三里"能够减轻STC大鼠结肠模型病理改变和ICC形态学改变,且可能可下调PINK1、Parkin、Beclin1、LC3表达,上调C-kit、p62表达,其中50 Hz电针作用更佳.

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