浙贝母叶斑病病原真菌的分子鉴定及杀菌剂筛选
Molecular Identification and Indoor Fungicide Screening of Pathogenic Fungi of Leaf Spot Disease of Fritillaria Thunbergii Miq
摘要[目的]明确浙贝母叶斑病的致病菌种类,并筛选有效杀菌剂.[方法]采用病组织分离法,从浙贝母叶斑病病株中分离纯化真菌,以聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增基因组DNA的内源转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)、翻译延伸因子-1α(translation elongation factor-1α,TEF-1α)和微管蛋白基因(tubulin gene,TUB)并双向测序,经 DNAMAN 9.0软件拼接后利用基本局部对齐搜索工具(basic local alignment search tool,BLAST)进行分析.采用邻接法构建系统发育树以鉴定真菌种类,采用菌饼接种寄主植物和组培苗的柯赫氏法检测致病性,以生长速率法和抑菌圈法室内筛选病原真菌的有效杀菌剂.[结果]从浙贝母叶斑病病株中分离纯化获得1种间座壳属(Diaporthe)真菌.分离物的ITS、TEF-1α和TUB扩增片段与GenBank 中 Diaporthe eres(无性型为 Phomopsis oblonga,P.oblonga)相应片段的同源性分别为 100%、99.73%和 96.95%(登录号:LC342971、MW804672、MT561360).在间座壳属中,分离物与P.oblonga的亲缘关系最近.该菌株接种浙贝母植株和组培苗后诱发浙贝母叶斑病.吡唑醚菌酯、咯菌腈、异菌脲、苯醚甲环唑、腈菌唑、咪鲜胺对该真菌的半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)分别为0.174、0.084、1.092、0.041、0.619和0.004μg·mL-1;6种杀菌剂对P.obloniga孢子萌发的抑制效果为咪鲜胺>吡唑醚菌酯>苯醚甲环唑>腈菌唑>咯菌腈和异菌脲.[结论]本研究证实,P.oblonga是浙贝母叶斑病病原真菌,咪鲜胺和苯醚甲环唑是防治浙贝母叶斑病的有效杀菌剂.
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