血清与海马内5-羟色胺和5-羟基吲哚乙酸的LC-MS/MS测定及其在白芍抗抑郁功效评价中的应用
LC-MS/MS Determination of 5-Hydroxytryptamine and 5-Hydroxyindole Acetic Acid in Serum and Hippocampus and Its Ap-plication in the Evaluation of Antidepressant Efficacy of Paeoniae Radix Alba
摘要[目的]建立一种用于测定血清和海马组织中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)和5-羟基吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid,5-HIAA)含量的液相色谱与串联质谱联用(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分析方法,并应用于中药抗抑郁功效的评价.[方法]取小鼠血清和海马组织,通过蛋白沉淀法进行样品前处理后,利用所建立的LC-MS/MS分析方法测定5-HT和5-HIAA的含量.采用Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,柱温为40℃,流动相为0.1%甲酸水(含2 mmol·L-1乙酸铵):乙腈,流速为1 mL·min-1,质谱检测选择多重反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式.将198只小鼠随机分为正常对照组、模型组、盐酸氟西汀组和30个白芍提取物组,每组6只.测定血清和海马中5-HT和5-HIAA含量,并进行悬尾实验与强迫游泳实验.[结果]5-HT和5-HIAA分别在0.1~1 000 ng·mL-1和1~500 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好(r>0.999),加样回收率和精密度均符合生物样品的分析要求.白芍提取物组5-HIAA/5-HT值相对于模型组的变化程度,与行为学实验指标变化程度具有一定相关性,且变化程度显著高于行为学实验,组内相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)更小.[结论]建立的LC-MS/MS分析方法操作简便快捷、结果准确、灵敏度高、重现性好、专属性强,可同时测定血清、海马组织中5-HT和5-HIAA的含量,适用于白芍等具有神经保护功效药物的研究及药效评价.
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