摘要[目的]探讨虫草素通过肌肉增生蛋白3A(muscle excess 3A,MEX3A)抑制肝癌细胞增殖的分子机制.[方法]以0、50、100、150、200及250μmol·L-1浓度的虫草素分别处理Huh-7肝癌细胞24、48及72 h,采用细胞增殖检测(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力,筛选出虫草素最佳干预浓度及时间.使用最佳干预浓度虫草素对Huh-7肝癌细胞进行干预,并进行高通量转录组测序,对测序结果进行生物信息学分析,筛选差异基因.设立空白对照组、MEX3A沉默组、MEX3A过表达组、虫草素组、虫草素+MEX3A沉默组和虫草素+MEX3A过表达组,以CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率及S期细胞比例,集落形成实验检测各组细胞的增殖情况.最后采用免疫印迹法检测各组细胞周期信号通路的关键蛋白细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、细胞周期蛋白依赖性激酶6(cyclin-dependent kinase 6,CDK6)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)及细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)表达的变化情况.[结果]虫草素最佳干预浓度为200μmol·L-1,干预时间为48 h.高通量测序后转录组基因差异分析显示,虫草素组与空白对照组共存在564个差异基因,下调明显的基因集包括MEX3A基因.京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析发现,明显下调的基因高度富集在细胞周期等促肝癌细胞增殖的信号通路.与空白对照组比较,虫草素可明显抑制Huh-7细胞中MEX3A的mRNA及蛋白表达(P<0.001).虫草素干预后Huh-7细胞活力降低、克隆数减少、凋亡增加、S期细胞比例减少(P<0.01).回复实验显示,虫草素+si-MEX3A使肝癌细胞的活力和克隆数进一步减少,凋亡率进一步增加(P<0.01),而S期细胞比例进一步减少(P<0.01).免疫印迹结果显示,虫草素干预组的CDK4、CDK6、Cyclin D1、CDK2和Cyclin E1蛋白表达明显降低(P<0.01),虫草素+MEX3A沉默组上述蛋白表达进一步降低(P<0.01).[结论]虫草素通过降低MEX3A表达调控细胞周期相关蛋白,从而抑制肝癌细胞的增殖.