摘要目的:探究长链非编码 RNA(long noncoding RNA,lncRNA)THAP7-AS1 通过影响甲基转移酶样 3(methyltransferase like protein 3,METTL3)介导的N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)修饰调控胃癌(gastric cancer,GC)细胞糖酵解的机制.方法:利用 Gene Expression Profiling Interactive Analysis(GEPIA)数据库分析THAP7-AS1和METTL3 mRNA在GC组织中的表达水平及其与患者预后的关系;对遵义医科大学附属第三医院(遵义市第一人民医院)肿瘤科收集的80例GC患者的肿瘤组织及癌旁组织标本进行实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测以验证GC组织中THAP7-AS1、METTL3 mRNA、GLUT1 mRNA和METTL3蛋白的表达水平,并分析THAP7-AS1的表达水平与患者临床病理特征间的关系;采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法在GES-1、BGC-823和SGC-7901细胞中验证THAP7-AS1、METTL3 mRNA、GLUT1 mRNA和METTL3蛋白的表达水平.通过慢病毒转染法敲减THAP7-AS1或过表达METTL3,并采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测不同处理对GC细胞METTL3 mRNA、GLUT1 mRNA和METTL3蛋白表达水平的影响;采用比色法和RNA甲基化免疫共沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)-定量 PCR(quantitative PCR,qPCR)法分别检测不同处理对GC细胞总RNA的m6A修饰水平和GLUT1的m6A修饰水平的影响;用糖酵解压力测试试剂盒检测不同处理对GC细胞的细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR)、葡萄糖摄取量和乳酸产量的影响;采用蛋白印迹法检测不同处理对GC细胞中METTL3、GLUT1、PKM2和LDHA蛋白表达水平的影响;采用EdU染色、细胞划痕实验和Transwell小室实验检测不同处理对GC细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响.最后构建裸鼠GC皮下移植瘤模型,通过检测移植瘤的体积、质量、肿瘤组织中THAP7-AS1及METTL3和GLUT1蛋白的表达水平来分析敲减THAP7-AS1表达对GC移植瘤生长的影响.结果:GEPIA数据库分析结果显示GC组织中THAP7-AS1和METTL3的表达水平高于正常胃组织,且THAP7-AS1和METTL3表达水平与患者的总生存期呈负相关(P＜0.05);与癌旁组织(或正常胃粘膜上皮细胞)相比,GC组织(或GC细胞)中THAP7-AS1、METTL3 mRNA、GLUT1 mRNA和METTL3蛋白的表达水平显著升高,且THAP7-AS1的表达水平越高,GC患者的TNM分期越高、肿瘤分化程度越低、微血管越容易浸润且越容易发生淋巴结转移(P＜0.05).降低 THAP7-AS1 表达后,GC 细胞中的 METTL3 mRNA、GLUT1 mRNA和METTL3蛋白表达水平降低;总RNA和GLUT1的m6A修饰水平降低;ECAR水平、葡萄糖摄取量及乳酸生成量降低;细胞EdU阳性率及划痕愈合率降低且侵袭细胞数减少;糖酵解相关蛋白(METTL3、GLUT1、PKM2和LDHA)的表达水平降低;而过表达METTL3可部分逆转低表达THAP7-AS1对GC细胞产生的这些影响(P＜0.05).在体内模型中,降低THAP7-AS1表达能显著抑制小鼠移植瘤的生长(P＜0.05).结论:lncRNA THAP7-AS1通过影响METTL3介导的m6A修饰来调控GC细胞的糖酵解水平,进而影响GC细胞的增殖、迁移及侵袭.