摘要目的:探讨磷脂酶D1(phospholipase D1,PLD1)在促进胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)细胞转移中的作用机制.方法:利用GSE(Genomic Spatial Event)公共数据库筛选PDAC肝转移灶及原位肿瘤中的差异表达的基因;选择PLD1作为促进PDAC转移的关键靶点,并在C57小鼠中用KPC细胞建立原位移植瘤模型,将小鼠原位及肝转移瘤块切片染色,检测其PLD1表达水平的差异;进一步利用PDAC组织芯片与患者的临床信息分析PLD1表达对PDAC患者预后的影响.通过分析PDAC组织中PLD1表达水平与患者预后的相关性,评估PLD1表达对胰腺癌转移的影响;在体外实验中应用PLD1过表达及敲降稳系进行Transwell小室及划痕愈合实验,验证改变PLD1表达水平对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响;应用PLD1过表达稳系与对照细胞在C57小鼠体内原位成瘤,利用小动物活体成像技术检测原位肿瘤的生长速率及肝转移情况;进一步采用蛋白质印迹法、Transwell小室实验和细胞划痕实验及PLD1酶活位点突变细胞系,确定PLD1发挥促进转移是否通过其经典酶活途径;通过实时荧光定量PCR法、转录组测序技术及阻断回复实验,确定PLD1调控的下游靶基因;利用小动物活体成像及小鼠原位成瘤技术证实下游靶点卵泡抑素样蛋白1(follistatin like protein 1,FSTL1)对于小鼠胰腺癌肝转移的影响.结果:PLD1在胰腺癌患者及原位成瘤C57小鼠模型中的肝转移灶上高表达,且表达量高于原发灶,在检测组织芯片中,高表达PLD1患者预后显著短于低表达的患者;在SW1990及MIA PaCa-2细胞系中过表达或敲降PLD1的表达,均可显著影响细胞的迁移和侵袭能力,过表达PLD1的KPC细胞系原位成瘤,相较于对照组形成更多的肝转移灶且转移灶的生物发光信号显著增强(P＜0.01);在SW1990细胞系中分别添加PLD1酶活通路的2种产物磷脂酸(phosphatidic acid,PA)及胆碱(choline)后,细胞的侵袭迁移能力无显著改变,且通过PLD1酶活位点突变稳系KRM验证,证实PLD1促进肿瘤细胞的迁移和侵袭并非通过经典酶活通路;在转录组测序中找到PLD1调控的下游分子FSTL1,并通过实时荧光定量PCR法证实其mRNA表达的一致性;通过阻断回复实验证实PLD1与FSTL1的上下游关系;在裸鼠体内注射过表达FSTL1的肿瘤细胞进行脾切除转移模型构建,证实FSTL1过表达确实可以诱导肿瘤细胞转移的增强,促进PDAC的进展.结论:PLD1高表达可以诱导FSTL1表达水平上调,从而促进肿瘤细胞发生上皮-间质转化,增强PDAC细胞的转移能力,促进胰腺癌的进展.