换一批
换一批焦磷酸测序检测NUDT15基因多态性的方法学评价
Methodological evaluation of pyrosequencing in detecting NUDT15 gene polymorphism
摘要目的 建立焦磷酸测序检测NUDT15 R139C基因多态性的方法并对其评价.方法 设计引物,考察不同退火温度(55、57、60℃),建立NUDT15多态性分型最佳反应条件.检测不同量的*1*15型DNA样本(10、2、0.4 ng),考察方法的灵敏度;比较焦磷酸测序和Sanger测序分型结果,考察方法的准确度;对*1*1型和*1*15型样本重复检测3次,考察方法的重复性.结果 明确扩增引物、57℃退火为焦磷酸测序检测NUDT15基因型的最佳条件,最低可检测0.4 ng基因组DNA;焦磷酸测序法和Sanger测序法的分型结果完全一致,方法准确度100％;批内重复3次检测结果完全一致.结论 建立了基于焦磷酸测序的NUDT15 R139C基因多态性分型方法,此方法稳定可靠,可投入临床使用并为个体化使用巯嘌呤类药物提供指导.
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