反相高效液相色谱法测定Fmoc-L-His(Trt)-OH中光学异构体Fmoc-D-His(Trt)-OH的含量
Determination of optical isomer Fmoc-D-His(Trt)-OH in Fmoc-L-His(Trt)-OH by RP-HPLC
摘要目的 结合外标法和面积归一化法,建立反相高效液相色谱法测定Fmoc-L-His(Trt)-OH中的光学异构体Fmoc-D-His(Trt)-OH的含量.方法 采用Chiral MX(2)-RH色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);以乙腈-水-乙酸(500∶500∶1)为流动相,等度洗脱;流速为0.8 mL·min-1;紫外检测器检测,波长为220 nm;柱温为30℃;进样体积为10 μL.结果 Fmoc-L-His(Trt)-OH和Fmoc-D-His(Trt)-OH分离良好;Fmoc-D-His(Trt)-OH在0.15~2.93 mg·mL-1 与峰面积呈良好的线性关系(相关系数为0.9999);定量限为0.15 μg·mL-1,检测限为0.049 μg·mL-1.回收率在95%~100%内,RSD为0.96%.结论 本方法操作简单,专属性强,灵敏度高,为Fmoc-L-His(Trt)-OH中光学异构体Fmoc-D-His(Trt)-OH研究提供参考.
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