换一批一项治疗复发难治性胃癌和食管癌的嵌合抗原受体修饰的T细胞激活转导条件优化研究
Optimization of chimeric antigen receptor-modified T cell activation and transduction parameter for relapsed and refractory gastric cancer and esophageal cancer
摘要目的 系统评估T细胞激活、转导及扩增培养等关键工艺参数对靶向Claudin 18.2 CAR-T细胞的质量影响,重点关注细胞活率、流式表型和靶细胞杀伤等关键质量属性.方法 采用健康志愿者来源的外周血单个核细胞,通过免疫磁珠分选获得T细胞.首先比较两种GMP级激活试剂(TransAct和Dynabeads)对CAR-T细胞扩增和病毒转导效率的影响,以确定最佳激活试剂;随后通过单因素实验优化激活试剂浓度;进一步探讨T细胞激活与病毒转导同步实施的可行性;最后评估不同密闭培养系统(G-Rex与WAVE bag)对CAR-T细胞扩增、免疫表型和生物学活性的影响,以确定最优培养装置.结果 TransAct激活试剂较Dynabeads能显著提高T细胞活率(P＜0.05),但两者在CAR+细胞比例和扩增倍数方面无显著差异.激活浓度优化实验显示,75%推荐激活浓度在细胞活率和总细胞扩增方面均优于 100%和50%浓度(P＜0.05).同步激活感染策略较传统激活过夜后感染方案提高了细胞总扩增、CAR+细胞比例和CAR+细胞扩增.在培养系统比较中,G-Rex封闭式培养系统在细胞活率、CAR+细胞比例、CAR+细胞扩增和T细胞干性记忆表型维持方面均优于WAVE bag系统,其中CAR+细胞比例和CAR+细胞扩增的提升均具有显著意义.结论 CAR-T细胞激活、转导及扩增培养最佳工艺参数为:选用TransAct作为T细胞激活试剂,采用 75%推荐激活浓度作为工作浓度,实施T细胞激活与慢病毒转染同步操作,并在扩增培养过程中使用G-Rex培养瓶.
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关键词
CAR-T细胞疗法工艺开发关键工艺参数关键质量属性免疫表型CAR-T cell therapyprocess developmentcritical process parametercritical quality attributeimmunophenotype
分类号
R735（消化系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.7539/j.issn.1672-2981.2025.09.030
发布时间
2025-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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