摘要目的 运用体外蛋白水平实验研究雄黄对微管及其聚合动力学的作用,初步探究雄黄靶向微管发挥抗肿瘤活性的可行性.方法 获取大鼠脑组织,通过循环离心法经过两个聚合-解聚循环提取并纯化,得到体外重组微管蛋白.Bradford法测定蛋白浓度后使用 SDS-PAGE凝胶电泳进行鉴定.使用浊度法考察雄黄对微管聚合动力学的影响.使用透射电镜表征微管聚合产物.利用微管蛋白的固有色氨酸荧光探究雄黄对微管蛋白的结合作用.结果 成功获得体外重组微管蛋白,经 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定所得样品符合微管蛋白分子量;浊度法实验表明雄黄剂量依赖性地抑制体外重组微管蛋白的聚合动力学,降低其聚合速率与聚合程度;透射电镜结果表明雄黄破坏聚合产物的丝状网络,诱导短棒状聚集体生成;荧光法实验表明雄黄导致微管的固有色氨酸荧光发生猝灭,发射光的最大波长发生红移.结论 雄黄具有体外靶向微管蛋白的能力,可为后续进一步拓展雄黄抗肿瘤的作用机制提供物质基础.
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