换一批
换一批超声辅助胶内酶切方法的优化及其酶切特点的分析
Optimization of Ultrasound-Assisted In-Gel Digestion Method and Analysis of Peptide Characteristics
摘要分别应用20、100和200 W超声功率对牛血清白蛋白以及人尿蛋白组的胶内条带进行胶内酶切,通过比较不同功率鉴定的多肽数和蛋白数,确定最优的超声功率.同时比较超声辅助酶切与传统过夜酶切方法,并分析超声辅助胶内酶切方法的特点.结果表明,超声功率为20 W时对胶粒破坏最小,样品损失最少,在牛血清白蛋白样品中鉴定的多肽数最多为65.在人尿蛋白组2个条带中,20 W方法鉴定的蛋白数分别为168和199,鉴定效果最优.通过对多肽误切率和不完全酶切多肽的定性和定量分析发现,超声酶切方法的误切率高于传统方法,但不完全酶切率较低.通过分析多肽误切位点发现,传统过夜酶切法和超声辅助酶切法的主要误切类型分别为脯氨酸(P)和天冬氨酸/谷氨酸(D/E),3种超声方法之间各种误切类型所占比例均无明显差别.超声辅助酶切可显著缩短蛋白质胶内酶切时间,其中20 W功率超声酶切的效果最佳.与传统过夜酶切法相比,超声辅助酶切多肽的鉴定结果更好,其多肽的误切率更高,不完全酶切率较低,可用于发现蛋白质组学研究.
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分类号
O657.63
栏目名称
研究报告
DOI
10.7538/zpxb.youxian.2016.0058
发布时间
2017-05-08
基金项目
国家重点基础研究发展计划
中国科技部重点基础研究发展计划
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