换一批基因步移在分离蚊虫细胞色素P450启动子中的应用及意义
The Application and Significance of Gene-walking in Isolating the Promoter of Cytochrome P450 from Mosquitoes
摘要[目的]快速扩增出白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP 6N3基因(CYP6N3)上游启动子区序列.[方法]根据本室已获得的白纹伊蚊CYP6N亚家族新成员CYP6N3全长cDNA的5＇-末端核苷酸序列,设计2个反向特异引物(GSP1和GSP2),利用4种限制性内切酶DraⅠ、EcoRⅤ、PvuⅡ和StuⅠ分别消化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株高分子量基因组DNA,消化产物与适配子连接产生4种消化的DNA库(DL1、DL2、DL3及DL4),并分别以此为模板,进行基因步移.用特异引物GSP1与适配子引物AP1进行第1步PCR扩增,然后再以第1步PCR产物为模板、用内部特异引物GSP2与内部适配子引物AP2进行第2次PCR扩增.[结果]第1步PCR结果显示:在上述4种消化文库中分别扩增出约806、2190、2 206和3 076bp的特异条带;第2步PCR结果与第1次PCR相类似,但各泳道主带扩增效率明显升高.[结论]本实验已成功地获得了白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6N3上游启动子区核苷酸序列及其4种限制性内切酶图谱.此外还对基因步移法在昆虫细胞色素P450多样性及其参与杀虫剂抗性分子机理研究中的意义进行了讨论.
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栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1672-3554.2001.06.002
发布时间
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省自然科学基金（(970092)）
国家"211"工程建设项目（(98124)）
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