换一批
换一批摘要[目的]以人包皮成纤维细胞(HFF)为模型,通过系统比较针对不同靶点的小干扰RNA(siRNA)对酸性鞘磷脂酶1(SMPD1)基因的沉默效果,筛选获得最有效的小干扰RNA序列,同时观察沉默SMPD1对细胞凋亡的保护作用.[方法]设计合成三对靶向SMPD1基因的小干扰RNA作为实验组,同时设立阴性对照组和脂质体组(lipofectamine 2000),瞬时转染原代培养的HFF细胞,采用荧光定量RT-PCR法及Western blot测定SMPD1表达抑制情况,并用化疗药物丝裂霉素诱导细胞凋亡,MTT法检测siRNA转染对细胞的保护作用.[结果]小干扰RNA1,2,3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为96.3%,39%,63.2%,以siRNA1最高,最佳浓度为50 nmo1/L,最佳作用时间为48 h.SMPD1蛋白在48 h出现沉默效果,96 h开始恢复.50 nmol/L的siRNA1可以有效抑制化疗药物丝裂霉素引起的细胞凋亡,细胞存活率为73.8%,与对照组存活率65.4%比较差异具有统计学意义.[结论]三对siRNA均具有一定的靶基因沉默效果,其中siRNA1效果最佳,沉默效率达到96.3%;靶向SMPD1基因的siRNA能有效抑制人成纤维细胞的凋亡.
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分类号
R3
栏目名称
基础研究
DOI
10.3321/j.issn:1672-3554.2007.02.009
发布时间
2007-05-09
基金项目
广东省广州市科技局科研项目
广东省卫生厅科研项目
国家自然科学基金
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