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大鼠骨髓间质干细胞定向分化为神经元的实验研究

Differentiation of Nestin-positive Mesenchymal Stem Cells in Rats into Neuron-like Cells

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摘要[目的]研究体外培养骨髓来源的表达nestin的成年大鼠骨髓间质干细胞(MSC)并诱导分化神经元样细胞的潜能,为中枢神经系统疾病的细胞移植治疗提供理想的供体.[方法]采用全骨髓法分离培养成年SD大鼠MSC,传至第6代的MSC接种在前一天涂有100 (u)g/L多聚赖氨酸的塑料培养瓶或培养皿中.用含100 mL/L FBS的DMEM/F12培养液添加10 ng/mL bFGF的培养液培养并以DMSO、BHA与Forskolin等诱导剂联合诱导MSC分化为神经元.流式细胞仪鉴定诱导前MSC的细胞表面抗原,免疫荧光检测诱导前及诱导后6 h、12 h、24 h神经元特异性抗原nestin、NF-200和GFAP表达率.[结果]流式细胞仪检测传至第6代MSC表面抗原CD29和CD44阳性率分为98.8%,96.6%.CD34和CD45阴性.免疫荧光鉴定传至第6代的MSC表达nestin阳性率为57.1%±6.9%,不表达NF-200和GFAP.诱导后30 min可见神经元样细胞出现.诱导后6 h、12 h、24 h经nestin和NF-200免疫荧光鉴定,诱导后6 h、12 h、24 h nestin阳性率分别为96.5%±1.9%.88.1%±5.4%,33.5%±5.4%,NF-200阳性率分别为90.1%±2.9%,97.5%±1.3%,98.1%±1.6%.[结论]骨髓来源的nestin阳性的MSC具有神经祖细胞特性并且可诱导分化为神经元样细胞,可作为种子细胞用于神经系统疾病的治疗.