环状RNA circ_0120051通过miR-144-3p/IDH2轴抑制心肌成纤维细胞的纤维化表型研究

CircRNA Circ_0120051 Inhibits the Fibrotic Phenotype of Myocardial Fibroblasts via Targeting miR-144-3p/IDH2 Axis

二维码有效期 120s

摘要[目的]研究环形 RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制.[方法]通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中 circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平.核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验鉴定circ_0120051的RNA稳定性.RT-qPCR检测circ_0120051在人心肌细胞AC16中的核质分布情况.利用腺病毒在C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circ_0120051,通过RT-qPCR和Western blot检测过表达circ_0120051对mCFs中纤维化相关基因表达的影响,利用细胞划痕实验检测对mCFs迁移能力的影响.通过RNA免疫共沉淀技术(RIP)验证circ_0120051与miR-144-3p间的结合作用,利用双萤光素酶报告基因实验鉴定miR-144-3p与靶基因异柠檬酸脱氢酶2(Idh2)3'-UTR的结合位点.[结果]Circ_0120051在心衰病人心肌中表达显著增加,而其宿主基因SLC8A1表达无显著差异.Circ_0120051主要定位于人心肌细胞的胞质中.RNase R消化实验证实circ_0120051相对于线性SLC8A1 mRNA具有典型的环状RNA稳定性.过表达circ_0120051可抑制mCFs中纤维化相关基因表达和mCFs的迁移能力.RIP实验证实circ_0120051与miR-144-3p之间具有明显结合作用.在mCFs中转染miR-144-3p可促进纤维化相关基因的表达,并有效逆转circ_0120051对mCFs纤维化表型的抑制作用.双萤光素酶报告基因实验证实miR-144-3p与Idh2的3'-UTR存在结合作用.miR-144-3p可在转录水平抑制mCFs中Idh2表达,而过表达circ_0120051可增加mCFs中IDH2表达.在mCFs中转染miR-144-3p和Idh2的小干扰RNA(siRNA),可一致性地逆转circ_0120051对纤维化相关基因表达和mCFs迁移的抑制作用.[结论]Circ_0120051通过特异结合miR-144-3p并增加其靶基因IDH2表达来发挥抑制mCFs纤维化表型的作用.

作者梁俣 ^[1] 胡志琴 ^[2] 温艺红 ^[3] 伍华燕 ^[3] 王娅 ^[3] 刘宇鹏 ^[1] 单志新 ^[4] 方咸宏 ^[1] 学术成果认领

作者单位 广东省心血管病研究所//南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院广东广州 510080 ^[1] 广州医科大学附属第五医院药学部, 广东广州 510799 ^[2] 华南理工大学医学院,广东广州 510006 ^[3] 广东省临床药理学重点实验室//南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院广东广州 510080 ^[4]

关键词心肌纤维化环状RNA 微RNA Circ_0120051 心肌成纤维细胞 cardiac fibrosis circular RNA miRNA Circ_0120051 cardiac fibroblast

分类号 R363.2

栏目名称 基础研究

DOI 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).20240305.004

发布时间 2024-04-22

基金项目

国家自然科学基金 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 广东省自然科学基金 广州市科技计划项目 广州市科技计划项目 广东省医院药师青年托举研究基金