换一批狭缝引导配体1-3'非翻译区抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用
Inhibitory Effects of the Slit Guidance Ligand 1-3' Untranslated Region on the Fibrotic Phenotype of Cardiac Fibroblasts
摘要[目的]研究狭缝引导配体1(Slit1)的3'非翻译区序列部分片段(Slit1-3' UTR)对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调节作用和可能机制.[方法]利用腺病毒介导在ICR乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达Slit1-3' UTR 1526nt序列(Slit1-3' UTR 1526nt),使用蛋白质免疫印迹技术评估mCFs中胶原Ⅰα1/(COL1A1)、胶原Ⅲα1/(COL3A1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等纤维化相关基因的表达水平,结合EdU和Trans-well实验评估对mCFs增殖和迁移能力的影响.利用血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)处理mCFs,检测Slit1-3' UTR 1526nt对于Ang Ⅱ处理mCFs中纤维化表型的影响.过表达Slit1-3' UTR 1526nt后转染miR-34a-5p的类似物,放线菌素D干预实验检测Slit1-3' UTR 1526nt的mRNA的稳定性.过表达Slit1-3' UTR 1526nt检测mCFs中miR-34a-5p及其靶基因SIRT1的水平.分别转染miR-34a-5p和靶向SIRT1基因的小干扰RNA(si-SIRT1),检测对Slit1-3' UTR 1526nt调控mCFs纤维化表型的影响.[结果]利用腺病毒可在mCFs中有效介导过表达Slit1-3' UTR 1526nt,过表达Slit1-3' UTR1526nt可显著抑制mCFs纤维化基因的表达和mCFs增殖、迁移能力,抑制Ang Ⅱ诱导mCFs的纤维化表型.放线菌素D实验结果显示转染 miR-34a-5p 降低 mCFs 中 Slit1-3' UTR1526nt 的稳定性,而过表达 Slit1-3' UTR 1526nt 时 mCFs 中 miR-34a-5p水平降低.转染miR-34a-5p可促纤维化表型,并可逆转Slit1-3' UTR 1526nt对mCFs纤维化表型的抑制作用.在mCFs中过表达Slit1-3' UTR 1526nt显著升高miR-34a-5p靶基因SIRT1水平,在mCFs中分别转染miR-34a-5p和siRNA可一致性地逆转Slit1-3' UTR 1526nt抑制mCFs的纤维化表型.[结论]Slit1-3' UTR1526nt通过特异结合miR-34a-5p并增加其靶基因SIRT1表达发挥抑制mCFs纤维化表型的作用.
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