换一批茶树咖啡碱合成酶基因原核表达、及其抗体制备与鉴定
Prokaryotic Expression of Caffeine Synthase Gene (TCS1), Its Polyclonal Antibody Preparation and Identification
摘要克隆出茶树咖啡碱合成酶基因,对其进行原核表达,并制备TCS1抗体,旨在从蛋白水平研究茶树体内TCS1的表达情况.根据GenBank登陆的TCS1基因的全长cDNA序列,找出其完整的ORF(开放阅读框),从茶树叶片cDNA中克隆了TCS1基因的开放阅读框,连接到pGEX-4T-2表达载体,经IPTG诱导表达重组蛋白pGEX-4T-2-TCS1.进行体外酶活检测后,亲和层析纯化重组蛋白,作为抗原免疫家兔,制备TCS1多克隆抗体.用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性.通过优化诱导条件,得出重组蛋白的最佳表达条件为:30℃、4h.诱导后的总蛋白、可溶性蛋白与包涵体蛋白均出现一条明显的外源蛋白条带.抗体经ELISA检测,效价为1∶2000,Western blot检测表明抗体具有相对较好的特异性.构建了TCS1原核表达质粒,同时成功制备了抗TCS1的多克隆抗体.
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关键词
茶树咖啡碱咖啡碱合成酶原核表达多克隆抗体Camellia sinensiscaffeinetea caffeine synthaseprokaryotic expressionpolyclonal antibody
分类号
S571.1
栏目名称
DOI
10.7525/j.issn.1673-5102.2015.03.003
发布时间
2015-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
安徽省高等学校省级自然科学研究项目（KJ2012A114）
安徽省自然科学基金青年科学基金（1208085QC53）
:长江学者
创新团队发展计划（IRT1101）
国家自然科学基金（31170649）
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