换一批
换一批摘要该研究旨在建立兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)原生质体分离纯化体系,以促进其基因功能研究和体细胞杂交育种.通过研究材料选择、渗透压调节剂浓度、酶添加量、酶解时间和纯化条件等关键因素,确定了酶解法提取兰州百合原生质体的最优参数.结果表明:继代30 d左右的兰州百合无菌苗叶片,在0.4 mol·L-1的甘露醇环境下,使用含15 g·L-1的纤维素酶和5 g·L-1的离析酶的酶解液酶解3 h,即能分离完整均一的兰州百合叶肉原生质体,平均产量超过4×106个·g-1,且细胞活力超过90％.在0.4 g·mL-1 PEG-4000介导下转染35S::GFP质粒15 min,成功获得阳性转化子.同时,在0.5 g·mL-1 PEG-4000与5 mmol·L-1 CaCl2(pH=10)作用下,原生质体发生融合,形成双核细胞.该体系的建立为兰州百合体细胞杂交育种提供了高质量的细胞材料,也为其基因功能研究搭建了平台.
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分类号
Q813.1
栏目名称
DOI
10.7525/j.issn.1673-5102.2024.06.014
发布时间
2024-12-23
基金项目
上海市科技创新行动计划农业科技领域项目（22N11900300）；
上海市中央引导地方科技发展资金项目（YDZX20223100003004）；
上海市专业技术服务平台能力提升项目（21DZ2292300）
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