全缘叶绿绒蒿谷胱甘肽S-转移酶基因(MiGST)克隆与功能分析
Cloning and Functional Analysis of a Glutathione S-Transferase Gene(MiGST)from Meconopsis integrifolia
摘要从全缘叶绿绒蒿(Meconopsis integrifolia)中克隆谷胱甘肽S-转移酶基因(MiGST),通过拟南芥(Arabi-dopsis thaliana)遗传转化鉴定生物学功能,旨在为全缘叶绿绒蒿不同部位类黄酮开发利用提供理论依据.本研究通过克隆MiGST基因,经生物信息学分析后采用实时荧光定量PCR分析组织表达特性;利用花序浸染法遗传转化拟南芥,采用硝酸铝比色法测定T1代拟南芥转基因株系中总黄酮含量变化.结果表明:MiGST基因CDS全长702 bp,编码234个氨基酸,其编码蛋白相对分子质量约为25 861.91 Da,理论等电点为5.84;MiGST蛋白与罂粟(Papaver somniferum)中GST蛋白亲缘关系最近;MiGST基因具有组织表达特异性,其中花中表达量最高,茎中表达量最低;过表达MiGST基因拟南芥植株总黄酮含量为野生型的1.27倍.本研究证实,过表达MiGST基因可显著提高转基因拟南芥的总黄酮含量,表明MiGST基因在全缘叶绿绒蒿类黄酮跨膜转运及累积过程中具有重要作用.
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