换一批金花茶SCoT-PCR反应体系的正交优化及引物筛选
Orthogonal Optimization of SCoT-PCR Reaction System and Selection of Primers in Camellia petelotii
摘要目的:建立适用于金花茶的SCoT-PCR反应体系,为金花茶组植物遗传多样性研究提供技术支持.方法:以金花茶基因组DNA为模板,采用SCoT分子标记方法,通过正交试验设计法对影响PCR反应体系的引物、DNA模板、2xTaq PCR Master Mix用量以及扩增程序进行筛选和优化.结果:最佳PCR反应体系为20μL:10 ng/μL 的 DNA 模板 1 μL,10μmol/L的引物 0.8 μL,2×Taq PCR Master Mix 12 μL,ddH2O 6.2 μL.PCR 扩增程序为 94℃预变性4 min;94℃变性35 s,退火60 s,72℃延伸80 s,30个循环,72℃延伸5 min,扩增产物4℃保存.结论:该研究所建立的SCoT-PCR反应体系经16份金花茶组样品的验证,反应体系稳定可靠,适于金花茶的SCoT分子标记研究.筛选出的10个引物均具有较高的多态性,为进一步深入开展金花茶遗传亲缘关系、品种鉴定、遗传育种等工作奠定了实验基础.
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分类号
R282.71
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DOI
10.13863/j.issn1001-4454.2022.12.010
发布时间
2023-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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