温肺降浊方通过Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对PINK1/PARKIN介导的线粒体自噬的影响

Effects of Wenfei Jiangzhuo Formula on PINK1/PARKIN-Mediated Mitochondrial Autophagy via Aβ25-35-Induced PC12 Cell Injury

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摘要目的:探讨温肺降浊方通过 Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对线粒体自噬的影响.方法:通过重组大鼠β-NGF分化PC12细胞,Aβ25-35干预其成为阿尔茨海默病细胞模型,确定Aβ25-35造模的最佳浓度和时间点,设立温肺降浊方含药血清低(2％)、中(4％)、高(8％)浓度组.MDC染色和JC-1染色法观察自噬小体和线粒体膜电位,免疫荧光化学染色、qPCR和Western Blot检测各组细胞中PINK1、PARKIN、Ubl、Ub、p-Ub、LC3B mRNA和(或)蛋白表达.结果:β-NGF分化PC12细胞在第6天后成为海马神经元细胞形态结构,AD细胞造模条件以5 μmol/L终浓度的Aβ25-35干预48 h最佳.与正常对照组比较,模型组自噬小体显著增多,线粒体膜电位明显降低,PINK1、PAR-KIN、Ubl、Ub、p-Ub、LC3B mRNA和(或)蛋白表达显著升高(P＜0.05).与模型组比较,温肺降浊方含药血清可使模型细胞自噬小体减少,线粒体膜电位明显升高,PINK 1、PARKIN、Ubl、Ub、p-Ub、LC3B mRNA和(或)蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论:温肺降浊方可减轻 Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与PINK1/PARKIN介导的线粒体自噬通路有关.