换一批摘要目的:克隆分析夏枯草中对羟基苯丙酮酸双氧化酶基因PvHPPD,并对其编码蛋白进行原核表达与纯化,为日后探索对羟基苯丙酮酸双氧化酶的生物学作用提供依据.方法:基于夏枯草转录组数据库,利用同源比对和电子克隆得到PvHPPD cDNA序列,设计引物扩增PvHPPD cDNA,并进行生物信息学分析.将PvHPPD cDNA序列连接到pMAL-c5x载体上融合麦芽糖标签,转化BL21(DE3)表达菌中,IPTG诱导蛋白表达并进行纯化.结果:PvHPPD的cDNA序列长1850 bp,ORF序列长1452 bp,编码483个氨基酸,编码蛋白为亲水性非跨膜蛋白.多序列比对分析表明,该基因具有HPPD蛋白特有的保守结构域,保守区域多集中在C端,N端多变化.系统进化分析表明,PvHPPD基因表达蛋白与唇形科植物聚为一组,并与虎尾紫苏的同源性达85％.体外蛋白表达发现该蛋白在上清液和沉淀(包涵体)中均有表达,沉淀中的表达更多.结论:该研究成功获得PvHPPD基因,并掌握了该基因编码蛋白的生物信息学特征及体外表达体系,该结果将有利于后续深入研究PvHPPD基因及其在迷迭香酸生物合成途径中的功能和调控机制.
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关键词
夏枯草对羟基苯丙酮酸双氧化酶(HPPD)基因克隆生物信息学分析原核表达Prunella vulgaris L.4-Hydroxyphenylpyruvate dioxygenase(HPPD)Gene cloningBioinformatics analysisProkaryotic expression
分类号
R282.71（中药学）
栏目名称
DOI
10.13863/j.issn1001-4454.2024.03.009
发布时间
2024-12-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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