换一批TaqMan探针荧光PCR定量检测白英及其伪品的研究
Study on TaqMan Probe Fluorescent PCR for Quantitative Detection of Solanum lyratum and Its Counterfeit Products
摘要目的:建立白英及其伪品的TaqMan探针实时荧光定量PCR鉴定方法,解决市场上白英与青杞混淆使用的难点问题.方法:根据白英和伪品青杞的ITS2 序列,筛选获得单核苷酸多态性(SNP)位点,设计白英特异性引物及探针,建立并优化实时荧光定量PCR方法,考察不同因素组合对PCR鉴别方法的影响,并对该方法的特异性和灵敏度进行考察和验证.结果:PCR反应参数为 95℃预变性3 min,40 次循环(95℃变性10 s,66℃退火35 s);PCR反应体系为BestarTMqPCR Master Mix(Taqman Probe)10 μL,探针(0.5 μmol/L)1 μL,上、下游引物(1 μmol/L)各1 μL,DNA模板 0.5 μL,ddH2 O 6.5 μL时,正品白英可出现特异性荧光曲线,而伪品无此曲线,其检测灵敏度为0.0616 ng/μL.结论:该研究建立的白英TaqMan实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高,操作便利,可用于白英药材及其颗粒制剂的质量监测.
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关键词
白英青杞TaqMan探针实时荧光定量PCR分子鉴定Solanum lyratum Thunb.Solanum septemlobum BungeTaqMan probeReal-time fuorescent quantitative PCRMo-lecular identification
分类号
R282.71（中药学）
栏目名称
DOI
10.13863/j.issn1001-4454.2025.03.010
发布时间
2025-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2023YFC3504102）
泉城产业领军人才支持计划创新团队项目（MRJT2105）
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