鸢尾糖基转移酶基因ItUGT476克隆及原核表达分析
Cloning and Prokaryotic Expression Analysis of Glycosyltransferase Gene ItUGT476 from Iris tectorum
摘要目的:克隆鸢尾Iris tectorum Maxim.糖基转移酶ItUGT476 基因,掌握其生物信息学、组织表达和蛋白原核表达等信息.方法:以鸢尾转录组中ItUGT476 基因序列设计特异性引物并进行 PCR 扩增,产物经测序后进行生物信息学分析;通过实时荧光定量 PCR 检测ItUGT476 基因在植物体内各组织的表达情况;利用同源重组技术构建pET-32a(+)-ItUGT476 基因重组载体在大肠杆菌中表达蛋白.结果:ItUGT476 基因的开放阅读框全长为 1 437 bp,编码478 个氨基酸.基因ItUGT476 的表达量从高至低分别为根茎、叶片、花.进化树分析表明,ItUGT476 编码蛋白与已知类黄酮UGTs聚在 7-O-UGT分支上.原核表达显示,ItUGT476 基因表达出 72.10 kDa目的蛋白.结论:该研究从鸢尾中克隆出糖基转移酶基因ItUGT476,为后续该基因的功能表征以及鸢尾类黄酮生物合成途径作用机制的解析奠定必要的研究基础.
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