换一批双重TaqMan探针实时荧光PCR法鉴别威灵仙和升麻
Identification of Clematidis Radix et Rhizoma and Cimicifugae Rhizoma by Dual TaqMan Probe Real-Time Fluorescent PCR
摘要目的:建立威灵仙及其掺伪品升麻的双重TaqMan探针实时荧光PCR鉴别方法.方法:以psbA-trnH序列为基础,分别设计威灵仙和升麻的特异性引物和探针,通过筛选和优化引物浓度、探针浓度、退火温度等主要条件,建立双重TaqMan探针实时荧光PCR反应体系;同时对该方法的精密度、重复性、特异性、灵敏度、掺伪量检测限等指标进行了专项考察,并对混合样品进行了可行性验证.结果:所建立的方法检测威灵仙的精密度试验平均Ct值为22.070,RSD为1.53%,检测升麻的精密度试验平均Ct值为19.438,RSD为1.44%;威灵仙重复性试验平均Ct值为 22.800,RSD为 2.30%,升麻重复性试验平均 Ct 值为 19.280,RSD 为 1.89%;在浓度为 0.0288～90 ng/μL的范围内,线性关系良好,威灵仙线性方程为y=-3.7703x+22.233,相关系数为 0.9967,升麻的线性方程为y=-3.9525x+21.447,相关系数为 0.9988;当二者相互掺入的比例低至 1%时,仍可获得典型的荧光扩增曲线.结论:该研究建立的双重TaqMan探针实时荧光PCR方法可有效检出威灵仙和升麻,为威灵仙药材的质量控制提供了专属性更强、灵敏度更高的检测方法.
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关键词
威灵仙升麻psbA-trnH双重实时荧光PCRTaqMan 探针Clematidis Radix et RhizomaCimicifugae RhizomapsbA-trnHDual real-time fluorescent PCRTaqMan probe
分类号
R282.71（中药学）
栏目名称
DOI
10.13863/j.issn1001-4454.2025.05.008
发布时间
2026-01-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
泉城产业领军人才支持计划创新团队项目（MRJT2105）
国家重点研发计划（2023YFC3504102）
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