摘要目的 探究并验证壮骨健膝方(骨碎补、杜仲、秦艽、独活等组成)治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的药效物质.方法 基于壮骨健膝方药物成分自建数据库,采用超高效液相串联三重四级杆质谱技术(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)定性定量检测壮骨健膝方入血成分;通过TCMSP、SwissTargetPrediction、SEA和Batman-TCM数据库筛选入血成分靶点,以"knee osteoarthritis"为关键词在GeneCards、OMIM、Drugbank数据库搜索膝骨关节炎相关靶点,将二者取交集后,通过Cytoscape软件构建入血成分-膝骨关节炎作用靶点网络,STRING平台构建蛋白互作网络,寻找核心成分与靶点;通过DAVID数据库对靶点进行基因本体(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;通过细胞实验,以核心成分在血清中的浓度干预炎症滑膜巨噬细胞、退变软骨细胞模型,ELISA法检测细胞上清中膝骨关节炎核心靶点指标的含量.结果 在壮骨健膝方含药血清中定性定量检测出6种原型入血成分,各成分及浓度分别为龙胆苦苷(1 002.02±51.60)ng·mL-1,佛手柑内酯(448.50±13.35)ng·mL-1,阿魏酸(225.60±9.61)ng·mL-1,獐牙菜苦苷(68.49±4.62)ng·mL-1,柚皮苷(2.34±0.09)ng·mL-1,柚皮素(1.69±0.07)ng·mL-1;6种入血成分靶点406个,膝骨关节炎疾病靶点2 492个,交集靶点155个,度值排前3位的核心成分分别是阿魏酸、柚皮素、龙胆苦苷,核心靶点包括肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)等;功能富集分析表明,壮骨健膝方通过多途径发挥其在膝骨关节炎中的药理作用,主要涉及炎症反应、凋亡过程、脂多糖的反应等;细胞实验结果显示,与模型组比较,阿魏酸组、柚皮素组、龙胆苦苷组均可明显抑制炎症滑膜巨噬细胞上清中IL-1β、TNF-α表达(P＜0.05);三者均可明显抑制退变软骨细胞上清中MMP-3、MMP-13表达(P＜0.05).结论 通过血清药物化学、网络药理学及细胞实验三方面的相互印证,揭示了阿魏酸、柚皮素、龙胆苦苷可能是壮骨健膝方治疗膝骨关节炎的核心药效物质,为该方深入开发和应用提供了客观依据.