摘要目的 基于网络药理学及体内实验探讨射麻止喘液治疗中性粒细胞型哮喘(NA)的分子机制.方法 (1)利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、文献检索及Swiss ADME、Swiss Target Prediction数据库检索、筛选射麻止喘液的活性成分及其作用靶点.利用OMIM、GeneCards、DisGeNET及DrugBank数据库检索、筛选NA疾病相关靶点.通过微生信平台对射麻止喘液活性成分作用靶点与NA疾病相关靶点取交集,得到射麻止喘液治疗NA的潜在作用靶点(共有靶点).采用Cytoscape 3.8 软件构建"中药-活性成分-潜在作用靶点"网络.通过STRING数据库建立潜在作用靶点蛋白互作(PPI)网络,使用内置Mcode插件分析获得核心靶点.使用Metascape平台对潜在作用靶点进行基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.(2)将BALB/C小鼠适应性喂养 1 周后,随机分为空白组、NA模型组、射麻止喘液低剂量组(2.5 g·kg-1)、射麻止喘液高剂量组(10 g·kg-1)、地塞米松对照组(1 mg·kg-1);通过腹腔注射致敏剂[鸡卵清白蛋白(OVA)+弗氏完全佐剂(CFA)]并通过雾化吸入激发的方法复制NA小鼠模型,第 0、7、14 天分别腹腔注射OVA+CFA(20 μg OVA+75 μg CFA,0.3 mL)致敏,第 21～30 天采用 5%OVA混悬液雾化激发(每次 8 mL,每次雾化时间40 min,每天 1 次);雾化激发前 1h各组灌胃给药,地塞米松对照组腹腔注射给药,每天 1 次.采用HE染色法观察小鼠肺组织病理变化;ELISA法检测肺泡灌洗液中IL-8 含量;RT-qPCR法检测肺组织中NLRP3、CXCR2 mRNA表达水平;免疫组化法检测肺组织中p-mTOR蛋白表达水平.结果 (1)共筛选得到射麻止喘液活性成分作用靶点 826 个,NA疾病相关靶点 154 个,取交集后得到射麻止喘液治疗NA的 51 个潜在作用靶点(共有靶点).通过"中药-活性成分-潜在作用靶点"网络分析得到槲皮素、木犀草素、山柰酚、豆甾醇、柚皮素等关键活性成分.通过对潜在作用靶点的PPI网络分析得到 29 个核心靶点,包括AKT1、IL6、TNF、EGFR、NLRP3、RELA、MIF、CXCR2、VEGFA等.GO功能富集分析得到 882 个生物学过程条目、33 个细胞组分条目、61 个分子功能条目;KEGG通路富集分析得到 142 条信号通路,主要涉及TNF信号通路、甲型流感信号通路、Toll样受体通路、MAPK信号通路、mTOR信号通路等.(2)动物实验结果:与空白组比较,NA模型组小鼠的气道黏膜损伤明显,结构紊乱,有大量炎性细胞浸润,黏膜充血、水肿,肺泡壁明显增厚,肺泡腔缩小;肺泡灌洗液中的炎症因子IL-8 水平明显升高(P＜0.05);小鼠肺组织NLRP3、CXCR2 mRNA表达显著上调(P＜0.01),p-mTOR蛋白表达水平明显升高.与NA模型组比较,射麻止喘液低、高剂量组小鼠肺组织支气管上皮细胞结构排列可见少许紊乱,气管及血管周围有少量的炎性细胞浸润,支气管黏膜充血水肿明显减轻;小鼠肺组织CXCR2 mRNA表达显著下调(P＜0.01),p-mTOR蛋白表达水平明显降低.射麻止喘液高剂量组小鼠肺泡灌洗液中的 IL-8 水平明显降低(P＜0.05);射麻止喘液低剂量组小鼠肺组织 NLRP3 mRNA表达明显下调(P＜0.05).结论 射麻止喘液对NA的治疗作用可能是通过槲皮素、木犀草素、山柰酚等关键活性成分,作用于NLRP3、CXCR2 等核心靶点,调控TNF信号通路、MAPK信号通路、Toll样信号通路、mTOR等关键信号通路来实现的.