加味孔圣枕中丹含药血清调控SIRT1/PGC-1α通路改善氧糖剥夺再灌注PC12细胞的线粒体功能

Modified Kongsheng Zhenzhong Dan Medicated Serum Regulates SIRT1/PGC-1α Pathway to Improve Mitochondrial Function of PC12 Cells After Oxygen-Glucose Deprivation/Reperfusion

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摘要目的基于SIRT1/PGC-1α通路探讨加味孔圣枕中丹含药血清对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤PC12 细胞的线粒体功能的改善作用及机制.方法采用大鼠PC12 细胞构建体外OGD/R细胞模型.细胞分组:正常组(10%FBS)、模型组(10%FBS)、10%含药血清组、5%含药血清组(5%含药血清+5%空白血清)、10%空白血清组(对照组).采用CCK-8 法检测细胞存活率,筛选合适的氧糖剥夺时间(2、4、6、8 h);MTT法检测细胞活性;线粒体压力测试(MST)法检测细胞氧气消耗速率(OCR);流式细胞术(Annexin V-PE/7-AAD双染法)检测细胞凋亡情况;Western Blot法检测PC12 细胞SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平.结果与正常组比较,氧糖剥夺 2、4、6、8 h后的PC12 细胞活性均明显下降(P＜0.05),选择氧糖剥夺 6 h作为后续实验造模时间.与正常组比较,模型组的细胞活性明显下降(P＜0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显降低(P＜0.05);细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显下降(P＜0.05).与模型组比较,加味孔圣枕中丹 10%、5%含药血清组的细胞活性明显提高(P＜0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显升高(P＜0.05);细胞凋亡率明显降低(P＜0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).结论加味孔圣枕中丹含药血清能改善OGD/R损伤PC12 细胞的线粒体功能障碍,抑制神经元凋亡,促进神经元存活,其作用机制可能与激活SIRT1/PGC-1α信号通路有关.