摘要目的 基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨益气通脉散(人参、丹参、三七、水蛭、土鳖虫、大黄)抗脑缺血再灌注损伤(CIRI)的作用机制.方法 (1)通过TCMSP、TCMID、ETCM数据库筛选益气通脉散各中药活性成分及其作用靶点;通过GeneCards、OMIM、TTD疾病数据库筛选CIRI疾病相关靶点;通过Venny 2.1 在线平台获得上述靶点的交集靶点,即益气通脉散治疗CIRI的潜在作用靶点.通过Cytoscape 3.7.1 软件构建"药物-活性成分-靶点"网络,并筛选出益气通脉散治疗CIRI的潜在活性成分.通过STRING 11.0 数据库进行潜在作用靶点的蛋白互作(PPI)分析,筛选核心靶点.通过Metascape数据库对潜在作用靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析.采用AutoDockTools 1.5.7 软件对关键活性成分与核心靶点进行分子对接验证.(2)采用大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)术建立CIRI大鼠模型.将SD大鼠随机分为:假手术组、模型组、益气通脉散低剂量组(0.27 g·kg-1)、益气通脉散高剂量组(1.08 g·kg-1)、尼莫地平组(30 mg·kg-1),每组 10 只.造模前 3 d开始预给药,每日 1 次,连续 7 d.采用改良神经功能缺损程度评分(mNSS)法对MCAO/R大鼠的神经功能缺损进行评估;TTC染色法检测脑梗死体积;尼氏染色法观察脑组织神经元受损情况;ELISA法检测大鼠血清炎症因子及氧化应激相关指标;TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡情况;Western Blot法检测脑组织中Bax、Bcl-2 蛋白表达水平.结果 (1)共得到益气通脉散的 46 个有效活性成分,178 个益气通脉散治疗CIRI的潜在作用靶点.分析出槲皮素、毛地黄黄酮、山柰酚、缬氨酸、尿嘧啶等关键活性成分;TNF、IL-6、STAT3、VEGFA、AKT1、IL-1β、CASP3、TP53、MAPK3、EGFR等核心靶点;潜在作用靶点参与炎症反应、氧化应激、细胞增殖分化、细胞凋亡等生物过程,涉及cAMP、NF-κB、PI3K-Akt等信号通路.主要活性成分槲皮素、毛地黄黄酮、山柰酚、缬氨酸与TNF、IL-6、STAT3、VEGFA等靶蛋白有较好的结合活性.(2)与模型组比较,各给药组大鼠的神经功能缺损评分明显降低(P＜0.05,P＜0.01),脑梗死面积均显著缩小(P＜0.01),脑组织缺血坏死区病理变化得到改善,脑组织缺血区神经元数量显著增加(P＜0.01),神经细胞凋亡率显著降低(P＜0.01),血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平及MDA含量显著降低(P＜0.05,P＜0.01),SOD、GSH-Px活性显著升高(P＜0.05,P＜0.01),脑组织中Bax蛋白表达显著下调(P＜0.01),Bcl-2 蛋白表达显著上调(P＜0.01).结论 益气通脉散可能通过通过减轻炎症及氧化应激反应,抑制细胞凋亡,发挥抗CIRI的作用.