摘要目的 探讨四君子汤能否通过上调miR-205-5p表达进而抑制胃癌细胞的迁移力、侵袭力以及上皮间质转化(EMT)进程,并筛查可能参与上述过程的miR-205-5p下游靶基因.方法 四君子汤含药血清制备:SD大鼠以四君子汤(6.9 g·kg-1)灌胃,每日 1 次,共 7 d.(1)将胃癌细胞MGC-803、AGS作为研究对象,分组及干预:生理盐水组(10%空白血清),四君子汤组(10%四君子汤含药血清),四君子汤+inhibitor NC组(10%四君子汤含药血清+转染抑制剂阴性对照),四君子汤+miR-205-5p inhibitor组(10%四君子汤含药血清+转染miR-205-5p抑制剂),各组血清处理均为 24 h.采用qPCR或Western Blot法检测各组细胞中miR-205-5p表达水平,Snail、MMP9、TIMP1 mRNA及蛋白表达水平;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力.(2)以人胃癌MGC-803 细胞为研究对象,分组及干预:阴性对照组(转染阴性对照小干扰RNA),miR-205-5p模拟物组(转染miR-205-5p模拟物).通过转录组测序分析miR-205-5p模拟物组vs阴性对照组的差异表达基因;采用qPCR技术对miR-205-5p过表达后下调的 3 个基因(ENC1、FGF7、CSF1)的表达水平进行验证;对差异表达基因进行GO功能及KEGG通路富集分析.结果(1)与生理盐水组比较,四君子汤组MGC-803、AGS 细胞的miR-205-5p表达水平均显著升高(P＜0.01).与四君子汤+inhibitor NC组比较,四君子汤+miR-205-5p inhibitor组MGC-803、AGS 细胞的miR-205-5p表达均显著下调(P＜0.01).(2)与生理盐水组比较,四君子汤组MGC-803、AGS 细胞的愈合率明显降低(P＜0.05),穿过基质胶的细胞数目显著减少(P＜0.01),细胞MMP9、Snail mRNA及蛋白表达显著下调(P＜0.05,P＜0.01),TIMP1 mRNA及蛋白表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01).与四君子汤+inhibitor NC 组比较,四君子汤+miR-205-5p inhibitor 组 MGC-803、AGS 细胞的划痕愈合率均明显升高(P＜0.05,P＜0.01),穿过基质胶的细胞数目显著增多(P＜0.01),细胞MMP9、Snail mRNA及蛋白表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01),TIMP1 mRNA及蛋白表达显著下调(P＜0.05,P＜0.01)(3)与阴性对照组比较,miR-205-5p 模拟物组 MGC-803 细胞中 miR-205-5p 表达显著上调(P＜0.01).转录组高通量测序结果:与阴性对照组比较,miR-205-5p模拟物组在过表达miR-205-5p的MGC-803细胞中共鉴定出 401 个发生显著变化的差异表达基因,其中 195 个基因表达上调,206 个基因表达下调.与阴性对照组比较,miR-205-5p模拟物组MGC-803 细胞在过表达miR-205-5p后,ENC1、FGF7、CSF1 mRNA表达均显著下调(P＜0.01),与测序得到的差异基因表达结果一致.差异表达基因主要富集在细胞黏附和细胞迁移等生物学过程,以及癌症的转录失调、PI3K-Akt信号通路、Rap1 信号通路等方面.结论 miR-205-5p能够介导四君子汤对胃癌细胞迁移、侵袭和 EMT进程的抑制作用,其机制可能与 miR-205-5p抑制其下游FGF7、ENC1、CSF1 等基因表达有关.