摘要目的 基于血清药物化学及蛋白芯片技术探讨加味六君子汤治疗慢性萎缩性胃炎的作用机制.方法(1)将Wistar大鼠随机分成空白对照组、加味六君子汤组(43.36 g·kg-1),每日灌胃给药 2 次,持续 7 d,制备加味六君子汤含药血清及空白血清.基于血清药物化学方法,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)分析技术,并结合文献报道和数据库信息,确认加味六君子汤的入血成分.(2)使用PharmMapper网站进行入血成分作用靶点预测;利用GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD和DrugBank数据库筛选慢性萎缩性胃炎疾病相关靶点;将上述靶点输入韦恩图制作平台,所得交集靶点即为加味六君子汤治疗慢性萎缩性胃炎的潜在作用靶点.通过STRING数据平台对潜在作用靶点进行蛋白互作(PPI)网络构建及核心靶点筛选.通过Cytoscape软件导入加味六君子汤入血成分、潜在作用靶点,构建"入血成分-靶点"网络,筛选核心成分.通过DAVID数据库对潜在作用靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析.利用AutoDock Vina软件对核心成分和核心靶点进行分子对接验证.(3)采用CCK-8 法检测GES-1 细胞活性,筛选 1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)最合适的造模浓度及加味六君子汤含药血清的最佳给药浓度.采用 40 μmol·L-1 MNNG干预GES-1 细胞,构建慢性萎缩性胃炎细胞模型,同时以 20%含药血清干预 24 h后,进行CSP100 plus磷酸化抗体芯片检测.结果(1)共鉴定出加味六君子汤入血成分 23 种.得到入血成分对应的作用靶点 424 个,慢性萎缩性胃炎疾病相关靶点 1 028 个,取交集得到加味六君子汤治疗慢性萎缩性胃炎的潜在作用靶点 109 个.筛选得到加味六君子汤治疗慢性萎缩性胃炎的核心靶点:TP53、IL6、TNF、SRC、EGFR、AKT1、CTNNB1、MMP9、CASP3、MAPK8,以及核心成分:甘草酸、DL-精氨酸、芸香柚皮苷、大豆素、茯苓酸G、人参皂苷Rg2、人参皂苷Ro、香风草甙、芹糖异甘草苷、人参皂苷Rb1.潜在作用靶点涉及的生物过程主要有对氧化应激的反应、脂多糖反应、细胞来源分子反应、凋亡信号通路等;KEGG通路主要涉及病毒、癌症、炎症等方面,主要通路包括PI3K/AKT信号通路、TNF信号通路、IL-17 信号通路、MAPK信号通路等.核心成分与核心靶点的 100 组分子对接结果中,结合能≤-5 kcal·mol-1 的对接组合有 93 组,结合能≤-7 kcal·mol-1 的对接组合有 73 组.(2)与模型组比较,经含药血清干预后,共有 49 个磷酸化抗体和 46 个非磷酸化抗体发生了明显变化.其中,在PI3K/AKT信号通路中有 18 个磷酸化抗体和 11 个非磷酸化抗体发生了显著变化;在MAPK信号通路中有 13 个磷酸化抗体和 17 个非磷酸化抗体发生了显著变化.结论 加味六君子汤可能通过甘草酸、人参皂苷Rg2、大豆素等入血成分,调控PI3K/AKT、MAPK关键信号通路,发挥治疗慢性萎缩性胃炎并延缓其向胃癌转变的作用.