摘要目的 基于人脐静脉内皮细胞(HUVECs)外泌体miR-145 调控人主动脉血管平滑肌细胞(HAVSMCs)表型转化角度探讨温心方治疗冠心病的作用机制.方法 给予大鼠温心方水煎剂 33.75 g·kg-1 灌胃,每天 1 次,连续 7 d,制备含药血清.(1)取对数生长期的HUVECs,分别设立模型组、温心方组、miR-145 mimic组、miR-145 inhibitor组、miR-145 inhibitor+温心方组.模型组加入 50 mg·L-1 ox-LDL培养 24 h;温心方组加入25％温心方含药血清培养 24 h后,再加入ox-LDL培养 24 h;miR-145 mimic组、miR-145 inhibitor组分别用miR-145 过表达质粒及小干扰RNA转染后,再加入ox-LDL培养 24 h;miR-145 inhibitor+温心方组在转染后加入 25％温心方含药血清培养 24 h,再加入 50 mg·L-1 ox-LDL培养 24 h.采用高速离心分离获取HUVECs外泌体,电镜观察外泌体形态,BCA 法及 NTA 法对外泌体蛋白浓度及粒径进行测定.(2)取对数生长期HAVSMCs,分别设立对照组、模型外泌体组、温心方外泌体组、miR-145 mimic外泌体组、miR-145 inhibitor外泌体组、miR-145 inhibitor+温心方外泌体组、Wnt抑制剂组.对照组继续使用培养基培养;Wnt抑制剂组加入 50 ng XAV-939(10 μmol·L-1);其余各组加入对应外泌体 50 ng(外泌体终浓度为 100 μg·mL-1),培养 24 h.采用MTT法检测HAVSMCs细胞增殖率;Transwell法检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;qRT-PCR 法检测细胞 miR-145、WNT2B 基因表达水平;Western Blot 法检测细胞 α 平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌 22α蛋白(SM22α)、骨桥蛋白(OPN)、Wnt1、β-catenin、LRP6、GSK-3β蛋白表达水平.结果 成功提取HUVECs外泌体,平均粒径为 140.6 nm,浓度为 1.6×108 个/mL.与对照组比较,模型外泌体组的HAVSMCs细胞增殖率明显升高(P<0.05),细胞迁移数显著增加(P<0.01);细胞凋亡率显著升高(P<0.01),S期细胞占比明显增加(P<0.05);HAVSMCs miR-145 基因表达显著下调(P<0.01),WNT2B基因表达显著上调(P<0.01);HAVSMCs收缩型标志蛋白α-SMA、SM22α表达显著下调(P<0.01),分泌型标志蛋白OPN及Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt1、β-catenin、LRP6、GSK-3β表达显著上调(P<0.01).与模型外泌体组比较,温心方外泌体组的HAVSMCs细胞增殖率明显降低(P<0.05),miR-145 inhibitor外泌体组的细胞增殖率明显升高(P<0.05);温心方外泌体组、miR-145 mimic外泌体组的HAVSMCs细胞迁移数明显减少(P<0.05),miR-145 inhibitor外泌体组的细胞迁移数明显增加(P<0.05);温心方外泌体组、Wnt抑制剂组的S期细胞明显减少(P<0.05);温心方外泌体组、miR-145 mimic外泌体组HAVSMCs miR-145 基因表达明显上调(P<0.05),WNT2B基因表达明显下调(P<0.05);温心方外泌体组、miR-145 mimic外泌体组、Wnt抑制剂组HAVSMCs的α-SMA、SM22α蛋白表达明显上调(P<0.05),OPN、Wnt1、β-catenin、LRP6、GSK-3β蛋白表达明显下调(P<0.05);miR-145 inhibitor外泌体组HAVSMCs的α-SMA、SM22α蛋白表达明显下调(P<0.05),OPN蛋白表达明显上调(P<0.05).与miR-145 inhibitor外泌体组比较,miR-145 inhibitor+温心方外泌体组、Wnt抑制剂组的HAVSMCs细胞增殖率明显降低(P<0.05),细胞迁移数明显减少(P<0.05);miR-145 inhibitor+温心方外泌体组HAVSMCs的α-SMA、SM22α蛋白表达明显上调(P<0.05),OPN、Wnt1、β-catenin、LRP6、GSK-3β蛋白表达明显下调(P<0.05).结论 温心方干预的HUVECs外泌体可上调HAVSMCs中miR-145表达,通过靶向WNT2B及抑制Wnt/β-catenin信号通路调控HAVSMCs向收缩型转化,抑制其增殖、迁移,减轻血管内膜增生,从而发挥防治冠状动脉粥样硬化的作用.