淫羊藿苷调控Src/FAK通路影响卵巢癌细胞顺铂耐药性的作用机制
Mechanism of Icariin Regulating Src/FAK Pathway Affecting Cisplatin Resistance in Ovarian Cancer Cells
摘要目的 基于类固醇受体共激活因子(Src)/黏着斑激酶(FAK)通路探讨淫羊藿苷对卵巢癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响.方法 通过依次递增顺铂浓度的方式构建顺铂耐药SKOV3 细胞(SKOV3/DDP).通过CCK-8法检测细胞增殖率,考察淫羊藿苷及顺铂的最佳干预浓度.SKOV3/DDP细胞分组及干预:对照组不做任何干预;顺铂组用 5 μg·mL-1 顺铂干预 24 h;顺铂+淫羊藿苷组用 5 μg·mL-1 顺铂与 20 μg·mL-1 淫羊藿苷同时干预24 h;顺铂+sc-3052 组用 5 μg·mL-1 顺铂与 3 μmol·L-1 sc-3052 同时干预 24 h;顺铂+淫羊藿苷+sc-3052 组用5 μg·mL-1 顺铂、20 μg·mL-1 淫羊藿苷与 3 μmol·L-1 sc-3052 同时干预 24 h.采用CCK-8 法检测细胞吸光度(A450)值;克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western Blot法检测SKOV3/DDP细胞中多药耐药相关蛋白 5(MRP5)、多重耐药蛋白 1(MDR1)、p-Src、p-FAK、磷酸化细胞外信号调节激酶 1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平.结果(1)收集可在 5 μg·mL-1 顺铂中稳定生长的SKOV3 细胞即为SKOV3/DDP.选择 20 μg·mL-1 淫羊藿苷、5 μg·mL-1 顺铂作为后续实验的干预浓度.(2)与对照组比较,顺铂组的上述各项检测指标均无明显差异(P>0.05).与顺铂组比较,顺铂+淫羊藿苷组 SKOV3/DDP 细胞的 A450 值、克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率以及 MRP5、MDR1、p-Src、p-FAK、p-ERK1/2 蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05);顺铂+sc-3052 组 SKOV3/DDP细胞 A450 值、克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率以及 MRP5、MDR1、p-Src、p-FAK、p-ERK1/2 蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05).与顺铂+淫羊藿苷组比较,顺铂+淫羊藿苷+sc-3052 组 SKOV3/DDP 细胞的 A450 值、克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率以及MRP5、MDR1、p-Src、p-FAK、p-ERK1/2 蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05).结论 淫羊藿苷可能通过抑制Src/FAK通路降低SKOV3/DDP细胞的顺铂耐药性.
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