摘要目的 基于核因子红细胞 2 相关因子 2(Nrf2)/血红素氧合酶 1(HO-1)通路探讨左归丸改善环磷酰胺(CTX)诱导的卵巢衰老大鼠氧化应激及卵巢生殖干细胞(OSCs)干性的机制.方法 将 8 周龄雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、戊酸雌二醇(EV)组(0.103 mg·kg-1)及左归丸低、高剂量组(1.850、3.702 g·kg-1),每组 6 只.采用首日大鼠腹腔注射环磷酰胺 50 mg·kg-1,第 2～15 天连续每日腹腔注射环磷酰胺 5 mg·kg-1,复制卵巢衰老大鼠模型.模型复制结束后各组灌胃给药,每日 1 次,持续 30 d.测定各组大鼠的体质量、卵巢湿质量,计算卵巢指数;监测大鼠动情周期,计算动情期紊乱率;采用HE染色法观察卵巢组织病理变化及各级卵泡计数;ELISA法检测血清抗缪勒管激素(AMH)、雌二醇(E2)、促卵泡刺激素(FSH)水平;检测卵巢组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;采用Western Blot、RT-qPCR法检测卵巢组织中Nrf2/HO-1 信号通路、细胞周期蛋白及OSCs细胞干性因子相关蛋白及基因的表达;免疫荧光法检测卵巢组织中OSCs干细胞标志物(Fragilis、MVH)的表达水平.结果 (1)与正常组比较,模型组大鼠的体质量、卵巢指数均显著降低(P＜0.001),动情期紊乱率显著升高(P＜0.001);原始卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡、黄体数量显著减少(P＜0.01,P＜0.001),闭锁卵泡数量显著增多(P＜0.01);血清E2、AMH水平显著降低(P＜0.001),FSH水平显著升高(P＜0.001);卵巢组织MDA水平显著升高(P＜0.01),SOD、GSH-Px活性显著降低(P＜0.05,P＜0.001);卵巢组织Nrf2、HO-1、NQO1、Cyclin D1、Cyclin E1、MVH、Oct4 蛋白表达均显著下调(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),p21 蛋白表达显著上调(P＜0.01);卵巢组织 Nrf2、HO-1、NQO1、Cyclin D1、Cyclin E1、MVH、Oct4 mRNA表达均下调,但差异无统计学意义(P＞0.05),p21 mRNA表达显著上调(P＜0.001);卵巢组织Fragilis、MVH荧光强度均显著下降(P＜0.05,P＜0.01).(2)与模型组比较,各给药组大鼠的体质量均明显增加(P＜0.05,P＜0.01),动情期紊乱率均显著降低(P＜0.01,P＜0.001);血清FSH水平均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);卵巢组织SOD活性显著升高(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),HO-1、Oct4 蛋白表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01),p21 蛋白表达显著下调(P＜0.05,P＜0.01),Nrf2、Oct4 mRNA表达均显著上调(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).戊酸雌二醇组及左归丸低剂量组大鼠的卵巢指数明显升高(P＜0.05,P＜0.01),原始卵泡数量显著增加(P＜0.01,P＜0.001);血清E2 水平明显升高(P＜0.05);卵巢组织GSH-Px活性显著升高(P＜0.05,P＜0.01),Nrf2、MVH蛋白表达明显上调(P＜0.05),NQO1、Cyclin D1 mRNA表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01),p21 mRNA水平显著下调(P＜0.01,P＜0.001).戊酸雌二醇组及左归丸高剂量组大鼠的窦状卵泡数量明显增加(P＜0.05),闭锁卵泡数量明显减少(P＜0.05);卵巢组织Cyclin D1 蛋白表达明显上调(P＜0.05),HO-1、MVH mRNA表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),Fragilis、MVH荧光强度均显著升高(P＜0.05,P＜0.01).左归丸高剂量组大鼠卵巢组织Cyclin E1 蛋白表达明显上调(P＜0.05).结论 左归丸可能通过Nrf2/HO-1 通路缓解CTX诱导卵巢衰老大鼠的氧化应激损伤,调节OSCs细胞周期,维持OSCs细胞干性,从而恢复卵巢功能,延缓衰老进程.