摘要目的 探究枸杞多糖通过MAP3K3 通路降低程序性死亡配体 1(PD-L1)表达从而抗肺腺癌的作用及其机制.方法 (1)体内实验:构建小鼠皮下肺腺癌移植瘤模型,观察枸杞多糖低、中、高(25、50、100 mg·kg-1)剂量用药对小鼠肿瘤生长及免疫器官的影响.(2)体外实验:枸杞多糖 0.25、0.5、1 mg·mL-1 处理H1299、A549细胞 48 h,CCK-8 法及平板克隆形成法检测各组细胞增殖情况,Western Blot及RT-qPCR法检测各组PD-L1蛋白和mRNA表达水平;建立来自健康人外周血激活的T淋巴细胞(PBMC)与肺腺癌细胞共培养体系,观察枸杞多糖用药前后对PBMC免疫杀伤作用的影响;1 mg·mL-1 枸杞多糖干预H1299 细胞后进行转录组学测序,筛选差异表达基因,并进行KEGG富集分析.以Western Blot和RT-qPCR法检测枸杞多糖用药后肺腺癌细胞MAP3K3 蛋白和mRNA表达水平.(3)回复实验:构建MAP3K3 过表达A549 人肺腺癌细胞株(A549 MAP3K3 OE),Western Blot法检测枸杞多糖用药后其PD-L1 蛋白表达情况,并观察MAP3K3 基因过表达前后以及枸杞多糖干预前后,PBMC对肺腺癌细胞免疫杀伤功能的影响.结果 (1)与对照组比较,枸杞多糖用药组瘤质量明显下降(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001);肿瘤组织病理学观察发现细胞密度降低,间质淋巴细胞浸润增多;枸杞多糖用药组免疫器官脾脏系数上升(P＜0.05).(2)枸杞多糖处理人肺腺癌细胞 48 h后细胞增殖活力无明显变化(P＞0.05);枸杞多糖用药后细胞PD-L1 蛋白和mRNA表达水平均下降(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001);枸杞多糖可增强激活的PBMC对肺腺癌细胞的免疫杀伤作用(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001);转录组学测序差异基因主要富集在MAPK通路;枸杞多糖用药组细胞MAP3K3 蛋白和mRNA表达水平下调(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).(3)A549 MAP3K3 OE 肺腺癌细胞中 PD-L1 高表达(P＜0.01);共培养实验发现 A549 MAP3K3 OE细胞对激活的PBMC免疫杀伤作用具有一定的抵抗性(P＜0.001),而枸杞多糖干预后,可一定程度恢复PBMC对A549 MAP3K3 OE细胞的杀伤敏感性(P＜0.01,P＜0.001).结论 枸杞多糖通过下调肺腺癌细胞MAP3K3 基因及PD-L1 表达,改善体外培养体系中激活PBMC的免疫杀伤功能,这可能是枸杞多糖抗肺腺癌的作用机制之一.