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717解毒合剂含药血清调控ECM重塑对蝮蛇毒诱导的NIH/3T3细胞损伤的修复作用

Therapeutic Effects of 717 Jiedu Mixture-Medicated Serum on ECM Remodeling in Repairing NIH/3T3 Cell Injury Induced by Agkistrodon halys Venom

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摘要目的探讨 717 解毒合剂含药血清通过调控细胞外基质(ECM)重塑对蝮蛇毒诱导NIH/3T3 细胞损伤的修复作用及其相关机制.方法将NIH/3T3 细胞分为对照组及蝮蛇毒组及 717 解毒合剂含药血清低、高剂量组,显微镜下观察各组细胞的形态和黏附情况,分别采用CCK-8 法、划痕实验、流式细胞术检测细胞的增殖、迁移和凋亡,ELISA法检测细胞上清中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1、TIMP-2、转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)等ECM相关酶和细胞因子的表达,RT-qPCR法检测细胞MMPs和TIMPs的mRNA表达,免疫荧光法检测Ⅰ型胶原(COL1)、Ⅳ型胶原(COL4)、纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)等ECM蛋白表达.结果与对照组比较,蝮蛇毒组细胞收缩、群落塌陷,增殖及迁移能力下降(P＜0.01),细胞凋亡率升高(P＜0.01),COL1、COL4、FN、LN 等蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01),MMP-2、MMP-9 蛋白和mRNA表达上调(P＜0.01),TIMP-2 蛋白和mRNA表达下调(P＜0.01),α-SMA蛋白和TIMP-1 mRNA表达上调(P＜0.05,P＜0.01),TIMP-1 和TGF-β1 蛋白表达的差异无统计学意义(P＞0.05);与蝮蛇毒组比较,717 解毒合剂含药血清组细胞形态恢复、聚集良好,增殖、迁移能力提高(P＜0.05,P＜0.01),细胞凋亡率下降(P＜0.01),COL1、COL4、LN等蛋白表达升高(P＜0.01),MMP-2、MMP-9 的蛋白和mRNA及TIMP-1 mRNA表达下调(P＜0.05,P＜0.01),TIMP-2 蛋白和mRNA表达上调(P＜0.05,P＜0.01),α-SMA和TGF-β1 蛋白表达进一步上调(P＜0.01).结论 717 解毒合剂含药血清可修复蝮蛇毒诱导的NIH/3T3 细胞损伤,促进ECM重塑,其机制可能与恢复MMPs/TIMPs表达平衡,促进α-SMA和TGF-β1 表达有关.