木蝴蝶总黄酮的抗氧化活性研究及其对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激和凋亡的影响
Antioxidant Activity of Total Flavonoids from Oroxylum indicum and Their Effects on H2O2-Induced Oxidative Stress and Apoptosis in HUVECs
摘要目的 探讨木蝴蝶总黄酮(TFO)的抗氧化活性及其对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激和凋亡的影响.方法 采用DPPH、ABTS和O2-清除、Fe2+和Cu2+螯合、Fe3+和Cu2+还原法测定木蝴蝶总黄酮的抗氧化水平.采用过氧化氢(H2 O2)诱导HUVECs损伤模型,测定木蝴蝶总黄酮干预处理后细胞活性和超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)和活性氧(ROS)的活性.采用Hoechst 33258、JC-1 和Annexin V-FITC/PI染色研究木蝴蝶总黄酮对细胞凋亡的影响.通过蛋白质印迹法检测核因子E2 相关因子 2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)和醌氧化还原酶 1(NQO-1)的表达,观察木蝴蝶总黄酮抗氧化应激和凋亡的作用机制.结果 木蝴蝶总黄酮具有较强的清除自由基和还原金属离子的能力,而金属螯合能力相对较弱.体外细胞实验显示木蝴蝶总黄酮可明显提高HUVECs的存活率(P<0.01,P<0.001),明显增强SOD和CAT的活性(P<0.05,P<0.001),降低LDH、MDA和ROS的水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001),降低H2O2 诱导的细胞凋亡(P<0.01,P<0.001),提高Nrf2、HO-1 和NQO-1 蛋白的表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001).结论 木蝴蝶总黄酮具有明显的抗氧化活性,可通过Nrf2/HO-1 通路缓解H2O2 诱导的氧化应激和细胞凋亡.
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