摘要目的 观察康复新液(美洲大蠊提取物)对脂多糖(LPS)诱导炎症微环境中人食管成纤维细胞(HEFs)损伤的作用及机制.方法 (1)以不同浓度康复新液(0％、0.5％、1％、2％、4％、8％、16％、32％)及不同浓度LPS(0、2、4、6、8、10、20、40 μg·mL-1)对HEFs干预 24 h后,采用CCK-8 法检测HEFs细胞增殖率,筛选合适的LPS诱导浓度及康复新液干预浓度.(2)将对数生长期HEFs细胞分为对照组、LPS组、0.5％康复新液组、1％康复新液组、2％康复新液组及醋酸泼尼松龙(PDNN,50 μg·mL-1)组;采用LPS(10 μg·mL-1)刺激 1 h诱导炎症微环境.采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的含量;免疫荧光法检测细胞中IL-6、核因子(NF)-κB p-p65、p-Smad3、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;qRT-PCR法检测细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB、转化生长因子(TGF)-β1、Smad3、α-SMA mRNA表达水平;Western Blot法检测细胞中NF-κB p65、NF-κB p-p65、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、p-IκBα、TGF-β1、Smad3、p-Smad3、α-SMA蛋白表达水平.结果 (1)后续实验选择 0.5％、1％、2％浓度康复新液进行干预;选择 10 μg·mL-1 LPS刺激诱导HEFs炎症微环境.(2)与对照组比较,LPS组HEFs细胞上清液中的 IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS含量均显著上升(P<0.01);细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA表达均显著上调(P<0.01);细胞NF-κB p65、NF-κB p-p65、IκBα、p-IκBα蛋白表达均显著上调(P<0.01);IL-6 细胞质红色荧光信号及NF-κB p-p65 细胞核绿色荧光信号均显著增强(P<0.01);细胞TGF-β1、Smad3、α-SMA mRNA表达均显著上调(P<0.01);细胞TGF-β1、Smad3、p-Smad3、α-SMA蛋白表达均显著上调(P<0.01);p-Smad3 细胞核绿色荧光信号及α-SMA细胞质红色荧光信号均显著增强(P<0.01).与LPS组比较,0.5％、1％、2％康复新液组及PDNN组细胞上清液中的IL-6、TNF-α、iNOS含量显著降低(P<0.01);细胞NF-κB p65、NF-κB p-p65、IκBα、p-IκBα蛋白表达均显著下调(P<0.01);IL-6 细胞质红色荧光信号及NF-κB p-p65 细胞核绿色荧光信号均显著减弱(P<0.01);细胞TGF-β1、p-Smad3 蛋白表达显著下调(P<0.01);α-SMA细胞质红色荧光信号显著减弱(P<0.01).与LPS组比较,2％康复新液组及PDNN组细胞上清液中的IL-1β含量显著降低(P<0.01);细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA表达均显著下调(P<0.05,P<0.01);细胞 TGF-β1、Smad3、α-SMA mRNA 表达均显著下调(P<0.01);细胞Smad3、α-SMA蛋白表达显著下调(P<0.01);p-Smad3 细胞核绿色荧光信号显著减弱(P<0.01).结论 康复新液可减轻 LPS诱导炎症微环境中 HEFs细胞的损伤和肌成纤维细胞表型转化,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad3 信号通路过度激活有关.该结果为康复新液治疗内镜黏膜下剥离术后的食管狭窄提供了一定的实验依据.