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补脾益肠丸重塑Tfh细胞稳态治疗溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证的作用机制

Mechanism of Bupi Yichang Pills in Remodeling Tfh Cell Homeostasis for Treating Ulcerative Colitis with Spleen Deficiency and Dampness Accumulation Syndrome

摘要目的 基于滤泡性辅助性T细胞(Tfh)稳态探讨补脾益肠丸(BPYCP)对溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证(SDDS-UC)的保护作用及机制.方法 将C57BL/6 小鼠随机分为空白组,模型组,补脾益肠丸低、中、高剂量组及美沙拉嗪组,采用番泻叶联合 2.0%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证,每日 1 次性灌胃1.5、3.0、6.0 g·kg-1 补脾益肠丸或 0.3 g·kg-1 美沙拉嗪(5-ASA),观察补脾益肠丸对小鼠溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证症状、中医证候积分、疾病活动指数(DAI)的影响.采用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理损伤,流式细胞术检测肠系膜淋巴结Tfh细胞及其亚群水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)、实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qRT-PCR)、免疫组化分别检测结肠细胞因子、Tfh细胞生物标志物的mRNA及蛋白表达水平.结果 与模型组比较,补脾益肠丸低、中、高剂量组可有效缓解小鼠溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证症状,明显增加小鼠体质量和结肠长度(P<0.05),降低中医证候积分、疾病活动指数、结肠质量和结肠质量指数(P<0.05),并拮抗结肠组织炎性细胞浸润和溃疡形成.并且,中、高剂量补脾益肠丸可明显降低溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证小鼠肠系膜淋巴结Tfh细胞比例及其标志物白细胞介素 21(IL-21)、白细胞介素 17A(IL-17A)、趋化因子受体5(CXCR5)、B细胞淋巴瘤 6 蛋白(Bcl-6)、诱导型T细胞共刺激因子(ICOS)及程序性死亡配体 1(PD-L1)的mRNA和CXCR5、ICOS的蛋白表达水平(P<0.05),并抑制炎性因子IL-21、IL-17A释放(P<0.05).此外,补脾益肠丸可明显下调Tfh1、Tfh17 和效应记忆性Tfh细胞(Tem-Tfh)比例,并上调Tfh2、滤泡调节性T细胞(Tfr)比例(P<0.05).结论 补脾益肠丸通过抑制Tfh细胞反应,调节Tfh细胞亚群分化,重塑Tfh细胞稳态,拮抗结肠炎症而有效缓解溃疡性结肠炎脾虚湿蕴证.

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