摘要目的 基于蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核起始因子 2α(eIF2α)/激活转录因子 4(ATF4)信号通路探讨黄芪桂枝五物汤对 2 型糖尿病周围神经病变小鼠的作用及机制.方法 采用高脂饲料联合冰上活动刺激骨骼肌胰岛素样生长因子 1 及胰岛素双受体功能缺失(MKR)小鼠,复制糖尿病周围神经病变(DPN)小鼠模型.将DPN小鼠随机分为 4 组:模型组、黄芪桂枝五物汤低剂量组(6.25 g·kg-1·d-1)、黄芪桂枝五物汤高剂量组(30 g·kg-1·d-1)、甲钴胺组(0.17 mg·kg-1·d-1),每组 8 只.另取 8 只同龄FVB小鼠作为正常组.按照上述剂量灌胃给药(10 mL·kg-1),每日 1 次,连续 28 d.给药结束后测量各组小鼠体质量、空腹血糖值(FBG);通过检测小鼠足底热痛觉敏感性及坐骨神经传导速度评估周围神经功能情况;采用HE、Masson染色法观察坐骨神经病理变化;透射电镜观察坐骨神经组织超微结构;TUNEL染色法检测坐骨神经细胞凋亡率;Western Blot法检测坐骨神经组织内质网应激及凋亡相关蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组小鼠体质量及FBG水平均显著升高(P＜0.01);舔(缩)足间隔时间显著缩短(P＜0.01),坐骨神经传导速度显著降低(P＜0.01);坐骨神经纤维排列混乱,形态不规则,部分轴索纤细萎缩,甚至消失,髓鞘肿胀,结构松散,部分呈空泡样改变,有较多的蓝色胶原纤维沉积,胶原纤维阳性面积占比显著升高(P＜0.01);坐骨神经髓鞘变形扭曲,施旺细胞结构破坏,胞质水肿,髓鞘板层松散,可见虫蚀样改变,厚度不均匀,轴索皱缩;坐骨神经细胞凋亡率显著升高(P＜0.01);坐骨神经组织 PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3、Bax蛋白表达显著上调(P＜0.01),Bcl-2 蛋白表达显著下调(P＜0.01).与模型组比较,各给药组小鼠的FBG水平均显著降低(P＜0.05,P＜0.01);舔(缩)足间隔时间显著延长(P＜0.05,P＜0.01),坐骨神经传导速度显著提高(P＜0.01);坐骨神经纤维排列较为有序,形态趋于规则,轴索结构较为完整,髓鞘形态较为清晰完整,脱髓鞘程度减轻,胶原纤维沉积减少;坐骨神经髓鞘形态较规则;坐骨神经组织e IF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3(34 kDa)、Bax蛋白表达显著下调(P＜0.05,P＜0.01),Bcl-2 蛋白表达显著上调(P＜0.01).与模型组比较,黄芪桂枝五物汤高剂量组、甲钴胺组小鼠的体质量明显降低(P＜0.05);坐骨神经胶原纤维阳性面积占比显著降低(P＜0.05,P＜0.01);坐骨神经髓鞘板层结构较为致密,虫蚀样空洞减少,神经纤维层分离状态减轻;坐骨神经细胞凋亡率明显降低(P＜0.05);坐骨神经组织PERK蛋白表达显著下调(P＜0.05,P＜0.01);坐骨神经组织Caspase-3(17 kDa)蛋白表达显著下调(P＜0.01).结论 黄芪桂枝五物汤能够改善DPN小鼠的坐骨神经功能,减轻神经组织病理损伤,可能与抑制PERK/eIF2α/ATF4 信号通路活性,下调促凋亡蛋白表达,上调抑凋亡蛋白表达,降低坐骨神经细胞凋亡率有关.