防风混淆品水防风的DNA条形码及荧光定量PCR快速检查方法建立
Establishment of a DNA Barcoding and Quantitative PCR Rapid Detection Method for the Adulterant Libonotis laticalycina Shan et shen in Saposhnikovia divaricata(Trucz.)Schischk
摘要目的 基于DNA条形码及荧光定量PCR(qPCR)检查法建立防风药材混淆品水防风的快速检查方法.方法 建立基于ITS2 序列防风、水防风DNA条形码,寻找防风和水防风的特异性位点,以邻接法构建防风及其伪品水防风的系统发育树;根据水防风特异性位点设计特异性引物(SFF、SFR),建立水防风荧光定量PCR方法;考察水防风qPCR检查法的掺伪检出限及灵敏度,并对市场收集的多批防风及其混淆品水防风样品进行快速检测.结果 防风及其伪品水防风DNA条形码系统发育树中 31 批防风样品与 6 批水防风样品呈现不同分支.qPCR结果显示,水防风Ct值明显小于防风,其中水防风检出限为 0.655 ng·mL-1;在防风DNA中掺杂1%水防风DNA时仍可检出.37 批药材样品中,6 批Ct值均<26 为水防风,30 批Ct值均>33 为防风,1 批Ct值为 30.68,为防风掺水防风,qPCR检查结果与DNA条形码、电泳检测结果一致.结论 本研究建立的防风混淆品水防风qPCR检测方法准确、灵敏度高,操作简便快捷,可应用于防风混淆品水防风的快速鉴别.
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