基于ITS2和psbA-trnH序列鉴别五味子和华中五味子
Identification of Schisandra chinensis and S.sphenanthera Based on ITS2 and psbA-trnH Sequences
摘要目的:基于核内转录间隔区 2(ITS2)和psbA-trnH序列,运用DNA条形码技术对五味子和华中五味子进行序列比对分析,建立快速、准确的分子鉴定方法,筛选最佳DNA条形码序列用于鉴别五味子和华中五味子真伪.方法:以五味子和华中五味子为材料,利用DNA提取试剂盒,分别提取五味子和华中五味子的总DNA,对ITS2 序列和psbA-trnH序列进行聚合酶链式反应扩增及测序分析,使用DNAMAN 6.0 软件统计其片段长度及变异位点个数,使用MEGA 5.0 软件对数据进行分析比对,计算Kimura 2-parameter遗传距离,通过数据库预测二级结构,并利用邻接法建立系统发育树进行分析.结果:五味子和华中五味子ITS2 序列片段长度为 231 bp,鉴别位点为腺嘌呤(A)-胸腺嘧啶(T)、鸟嘌呤(G)-T、T-A;在psbA-trnH序列中,存在 7 个稳定的鉴别位点,分别为G-A、T-G、胞嘧啶(C)-A、T-A、缺失-T、A-T、G-T,五味子和华中五味子ITS2 序列二级结构存在明显差异,能将两者进行区分.结论:ITS2 和psbA-trnH条形码均可以用于区分五味子和华中五味子,但psbA-trnH条形码种内遗传更稳定,种间鉴别位点更多,研究为五味子和华中五味子的快速、准确鉴定和用药安全提供科学依据.
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