换一批
换一批PARK2介导的线粒体自噬对锰诱导的神经细胞毒性的作用
Protective mechanism of PARK2/Parkin-mediated mitophagy in manganese-in-duced neurotoxicity
摘要目的 用SK-N-SH细胞构建PARK2基因过表达/敲除稳转株,用于阐明PARK2和锰毒性的关系.方法 慢病毒转染S K-N-S H细胞构建PARK2基因过表达/敲低细胞稳转株,分为3组:空载质粒组、PARK2过表达组和PARK2敲低组.以900μM Mn2+对各组细胞染毒24 h后,用荧光探针检测细胞内ROS水平,电镜下观察细胞内自噬小体数量,WB法检测OPTN、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达,ELISA法检测细胞培养基中DA水平.结果 与空载质粒组比,PARK2过表达组细胞内Par-kin蛋白表达增多、ROS水平降低、自噬小体数量增多、P62和OPTN蛋白表达下调、LC3Ⅱ/Ⅰ值增加及DA水平升高(P＜0.05).PARK2敲低组细胞内Parkin蛋白表达降低、P62和OPTN蛋白表达上调(P＜0.05),而ROS水平、自噬小体数量、LC3Ⅱ/Ⅰ值以及DA含量与空载质粒组无差异.结论 过表达PARK2基因能提高Parkin蛋白的表达,促进细胞内线粒体自噬来清除受损的线粒体,从而保护细胞.OPTN和P62蛋白可能作为PARK2的下游蛋白参与线粒体自噬过程.
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