换一批巴西苏木素对MRSA丙氨酸消旋酶抑制作用的初步研究
Preliminary studies on the inhibitory effect of Brazilinon MRSA alanine racemization enzyme
摘要目的 探讨巴西苏木素(BN)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)丙氨酸消旋酶(Air)的抑制作用.方法 PCR扩增MRSA丙氨酸消旋酶基因Alr,通过使用酶切和连接技术构建重组表达质粒pET-28a-Alr,然后将其转化至E.coil BL21(DE3)中,利用IPTG诱导表达Alr,并通过镍离子亲和层析法进行纯化;试验分为对照组MOCK(不作任何处理)、不同浓度BN组(8、16、32、64 μg/mL),分别测定不同浓度BN对Alr活性的影响;通过细胞热位移分析(CETSA)实验测定BN对Air蛋白热稳定性的影响;利用软件AutoDock Vina将BN与Air进行分子对接,预测两者之间的结合模式.结果 成功诱导表达纯化Alr蛋白,且其具备将L-丙氨酸外消旋为D-丙氨酸的活性.与对照组相比,不同浓度的BN均能够抑制Alr的活性,其中在64 μg/mL BN作用下,抑制率达到50％(P＜0.0001).CETSA实验结果显示,在55.9～59.5 ℃下BN处理后的Air蛋白热稳定性明显高于Mock组(P＜0.0001).分子对接结果显示BN与Air之间的结合能为-8.0 kcal/mol,与Air活性位点内的Gly221、Phe169、Arg219、Ser204、Ile222和Tyr43形成氢键,与其活性位点通道的Ile352、Tyr354形成π-π键及疏水作用,与Asn203形成疏水作用.结论 BN对Alr的活性具有抑制作用,可能是因为BN与Air蛋白活性位点处的结合能力相关.
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关键词
巴西苏木素耐甲氧西林金黄色葡萄球菌丙氨酸消旋酶分子对接brazilianmethicillin-resistant staphylococcus aureusalanine racemasemolecular docking
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2024-02-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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