换一批高产乙醇肺炎克雷伯adhE缺失菌株构建及对其产乙醇能力的影响
Construction of adhE gene deletion mutant and compensation strains in high-alcohol producing Klebsiella pneumoniae and its effects on alcohol production
摘要目的 探究基因adhE缺失对高产乙醇肺炎克雷伯菌株生长能力,乙醇脱氢酶活性及产乙醇能力的影响.方法 以高产乙醇肺炎克雷伯菌株TH1为背景,利用温敏型质粒介导的同源重组技术构建基因adhE的缺失菌株.通过PCR扩增获取基因adhE片段并构建于pGEM-Teasy表达载体获得回补质粒,导入△adhE缺失菌株得到回补菌株,并将pGEM-Teasy空质粒导入高产乙醇肺炎克雷伯野生菌株及△adhE缺失菌株作为空载对照.在液体LB培养基中测定各菌株的生长曲线,使用试剂盒检测各菌株的乙醇脱氢酶活性并通过顶空法检测各菌株的乙醇产量.结果 使用PCR技术明确△adhE缺失菌株与相关回补菌株构建成功.基因adhE缺失后,厌氧条件下高产乙醇肺炎克雷伯菌株的生长速度显著降低,而回补菌株的生长速度显著升高(P＜0.05).同时,相比于野生型菌株,△adhE缺失菌株的乙醇脱氢酶活性与乙醇产量显著降低,而回补菌株的乙醇脱氢酶活性与乙醇产量恢复到了野生型菌株的水平(P＜0.05).结论 基因adhE的缺失减缓了高产乙醇肺炎克雷伯菌株厌氧条件下的生长速度,同时显著降低了高产乙醇肺炎克雷伯菌株的产乙醇能力.
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2024-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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