摘要目的:基于网络药理学方法及实验研究,探讨通脉开窍丸治疗血管性痴呆(vascular dementia,VD)的分子作用机制.方法:通过网络药理学分析获得通脉开窍丸治疗VD的可能靶点和信号通路.将 72 只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、通脉开窍丸 6.9、13.8、27.6 g/kg组、盐酸多奈哌齐 0.45 mg/kg组.采用改良 2-VO造模方法构建VD大鼠模型;水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力变化;HE和尼氏染色观察大鼠海马神经元病理形态及数量变化;透射电镜观察海马神经元超微结构;免疫组化法(IHC)和Western blot法检测大鼠海马组织中核心靶点与通路的表达.结果:发现通脉开窍丸有效活性成分有 121 个,潜在靶点124 个.VD的靶点有 2 506 个,两者交集靶点为 76 个;关键靶点为半胱氨酸蛋白酶-3(CASP3)、上皮生长因子(EGFR)、丝裂原活化蛋白激酶 8(MAPK8)、缺氧诱导因子 1α(HIF1A)等;GO功能富集分析生物过程得到 338 个条目,主要有正向调控、细胞凋亡过程的负向调节、对脂多糖的应答等;分子功能得到 64 个条目,主要富集在转录因子活性;细胞组分得到 86 个条目,主要集中在半胱天冬酶复合物、大分子复合体、染色质、突触等;KEGG通路富集分析主要涉及通路有脂质和动脉粥样硬化、癌症通路、磷脂酰肌醇-3 激酶(PI3K)/蛋白激酶(AKT)信号通路、TNF信号通路、AGE-RAGE信号通路等.动物实验结果显示,与模型对照组相比,通脉开窍丸6.9、13.8、27.6 g/kg组及盐酸多奈哌齐 0.45 mg/kg组能有效改善VD大鼠学习记忆能力(P<0.01),海马神经元形态较明显恢复,数量有所增加,线粒体结构和功能好转,大鼠海马组织中CASP3 蛋白阳性表达显著下调(P<0.01),PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT表达明显上调(P<0.05 或P<0.01),在一定范围内,通脉开窍丸治疗效果呈现剂量依赖性.结论:本研究初步揭示通脉开窍丸的活性成分与VD的关键蛋白之间存在一定关系,通过多靶点、多通路的综合调控网络发挥治疗VD的作用,其作用机制可能与激活PI3K/AKT信号通路以及抑制细胞凋亡有关.