摘要目的:借助 3D体外共培养模型探讨补肾调经方含药血清经人子宫内膜基质细胞(HESC)、缺氧诱导因子 2α(HIF-2α)介导途径调控人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8)侵袭的作用及机制.方法:采用CCK-8 法筛选出补肾调经方大鼠含药血清最佳浓度.使用分化混合物体外诱导HESC蜕膜化.将蜕膜化的HESC与HTR-8形成的人滋养细胞胚泡样球体(BLS)共培养,建立 3D体外共培养模型.在缺氧条件下,利用特异性siRNA靶向敲低蜕膜化HESC中HIF-2α,以补肾调经方含药血清干预蜕膜化的HESC,收集蜕膜化HESC条件培养基刺激HTR-8.实验分为正常对照血清组、10%补肾调经方含药血清组、阴性对照组、siRNA-HIF-2α组和siRNA-HIF-2α+10%补肾调经方含药血清组.3D体外共培养模型观察补肾调经方含药血清对BLS迁移能力与侵袭能力的影响;ELISA法检测HESC条件培养基中血管内皮生长因子(VEGFA)含量;Western blot和RT-qPCR法分别检测蜕膜化HESC中HIF-2α及下游分子赖氨酸氧化酶(LOX)、VEGFA蛋白及 mRNA表达,HTR-8 中存活信号磷酸肌醇 3 激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶(p-AKT)及侵袭信号表皮生长因子结构域 7(EGFL7)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、NOTCH1 蛋白及其mRNA表达.结果:与正常对照血清组比较,13.5 g/kg补肾调经方 10%含药血清组 24、48 h BLS的类胎盘绒毛延伸范围扩大,迁移直径扩大(P<0.05),蜕膜化HESC中HIF-2α、LOX和 VEGFA蛋白及 mRNA表达明显上调(P<0.05 或 P<0.01),条件培养基中 VEGFA含量显著增加(P<0.01),HTR-8中PI3K、p-AKT、EGFL7、MAPK、NOTCH1 蛋白及其mRNA表达明显上调(P<0.05 或P<0.01);与阴性对照组比较,siRNA-HIF-2α组 24、48 h BLS的类胎盘绒毛延伸范围较小,迁移直径减小(P<0.05),黏附率显著降低(P<0.01),蜕膜化HESC中HIF-2α、LOX和VEGFA蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05 或P<0.01),条件培养基中VEGFA含量显著减少(P<0.01),HTR-8中PI3K、p-AKT蛋白及其mRNA表达明显下调(P<0.05 或P<0.01);与siRNA-HIF-2α组比较,siRNA-HIF-2α+13.5 g/kg补肾调经方 10%含药血清组 24、48 h BLS的类胎盘绒毛延伸范围扩大,迁移直径显著扩大(P<0.01),黏附率显著提高(P<0.01),蜕膜化HESC中HIF-2α、LOX和 VEGFA蛋白及 mRNA表达明显上调(P<0.05 或 P<0.01),条件培养基中 VEGFA含量显著增加(P<0.01),HTR-8中PI3K、p-AKT蛋白及其mRNA表达明显上调(P<0.05 或P<0.01).结论:补肾调经方含药血清可能通过蜕膜化HESC中HIF-2α/LOX/VEGFA通路激活HTR-8的存活信号PI3K/AKT,并增强HTR-8的侵袭信号EGFL7/MAPK/NOTCH1 的表达,从而促进HTR-8的迁移与侵袭.