摘要目的:基于网络药理学、分子对接结合体内验证的方法探究花椒提取物外用对特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)小鼠的作用机制.方法:利用UPLC-Q-Orbitrap HRMS技术对花椒提取物的化学成分进行快速识别和鉴定;通过Swiss Target Prediction、SEA平台预测花椒提取物成分的潜在靶点,通过GeneCards和Drugbank数据库收集AD相关靶点,运用String数据库构建关键靶点PPI网络图;基于Metascape数据库进行KEGG分析,利用Cytoscape软件构建药物-成分-靶点-疾病-通路网络图;采用Discovery Studio的CDOCKER模块进行分子对接.构建AD模型小鼠,给予外用花椒提取物0.02、0.03 g/kg进行药理实验验证,观察AD小鼠抓挠次数、计算耳厚度差和脾脏指数;ELISA法检测小鼠皮肤白介素-6(IL-6)、IL-13、IL-31、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血清免疫球蛋白E(IgE)含量;HE染色法观察皮肤组织病理;免疫组化法检测皮肤组织TRPV1 和TRPV3 的阳性表达.结果:鉴定出花椒提取物中22 个化学成分,得到成分相关靶点 194 个,疾病相关靶点共 1 680 个,交集靶点 68 个;通过PPI网络筛选获得核心靶点 29 个;KEGG通路富集分析发现,TRP 通道的炎性介质调节通路可能是花椒提取物作用于AD的主要信号通路;药物-成分-靶点-疾病-通路网络图显示花椒提取物中羟基-ε-山椒素、羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素排名靠前,可能是治疗AD的重要成分.瞬时电位离子通道(TRP 通道)中的TRPV1、TRPA1 排名靠前,提示其是治疗疾病的重要靶点.分子对接表明,羟基-ε-山椒素、羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素与TRPV1、TR-PV3 有良好的结合亲和力.动物实验结果显示,与模型对照组比较,花椒提取物外用各剂量组AD小鼠皮损评分降低(P<0.01),AD小鼠抓挠次数、耳厚度差和脾脏指数降低(P<0.01),AD小鼠皮肤IL-6、IL-13、IL-31 含量降低(P<0.01),花椒提取物0.03 g/kg组皮肤TNF-α含量和血清IgE含量明显降低(P<0.05),病理性增厚和皮肤炎性细胞浸润明显减轻,TRPV1 和TRPV3 的阳性表达显著下调(P<0.01).结论:花椒提取物外用可以有效缓解AD的瘙痒和炎症,其作用机制可能是抑制TRPV1、TRPV3 通道的活性或下调TRPV1、TRPV3 的表达.