换一批附子病原微生物qRT-PCR检测方法的建立及定量分析
Establishment and Quantitative Analysis of a qRT-PCR Detection Method for Pathogenic Microorganisms in Aconiti Lateralis Radix Praeparata
摘要目的:本研究拟建立附子病原微生物卷枝毛霉(Mucor circinelloides)、罗耳阿太菌(Athelia rolfsii)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测方法,并定量分析附子样本和根际土壤中各病原微生物的丰度.方法:针对卷枝毛霉、罗耳阿太菌ITS区,铜绿假单胞菌、黏质沙雷氏菌16S区的特异性区域,设计引物并通过PCR扩增及凝胶电泳检测引物特异性.制备质粒标准品构建定量检测标准曲线,并检测灵敏度.运用建立的qRT-PCR检测方法对全国21 个附子种植地附子样本及根际土壤中的卷枝毛霉、罗耳阿太菌、铜绿假单胞菌、黏质沙雷氏菌含量进行定量检测.结果:引物均有较高特异性;得到卷枝毛霉定量标准曲线为Y=-2.62X+29.40,(R2=0.97);罗耳阿太菌定量标准曲线为Y=-3.85X+43.01,(R2=0.99);铜绿假单胞菌定量标准曲线为 Y=-3.00X+34.43,(R2=0.98);黏质沙雷氏菌定量标准曲线为 Y=-2.23X+26.95,(R2=0.99);21 个产地根际土壤样本与对应附子样本中卷枝毛霉、罗耳阿太菌、铜绿假单胞菌、黏质沙雷氏菌4 种病原微生物的丰度并不一致.结论:基于qRT-PCR建立的附子病原微生物卷枝毛霉、罗耳阿太菌、铜绿假单胞菌、黏质沙雷氏菌的检测方法可靠.卷枝毛霉、罗耳阿太菌可能主要来源于根际土壤,而铜绿假单胞菌、黏质沙雷氏菌除根际土壤外推测还有其他重要来源.
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分类号
R282.5（中药学）
栏目名称
DOI
10.19664/j.cnki.1002-2392.250248
发布时间
2025-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
陕西省重点研发计划（2019ZDLSF04-01-01）
陕西省重点研发计划（2020SF-326）
陕西省重点研发计划（2022SF-591）
陕西省中医药管理局科研项目（2021-ZZ-ZY012）
荆门市科技计划项目（2024YFYB002）
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