共培养条件下肌卫星细胞C2C12对软骨细胞ATDC5活性的影响
Effect of skeletal muscle satellite cells C2C12 on the activity of chondrocytes ATDC5 in the co-cultured condition
摘要目的:观察共培养条件下肌卫星细胞C2C12对软骨细胞ATDC5活性的影响.方法:①将肌卫星细胞C2C12分为对照组和地塞米松组,对照组常规培养,地塞米松组采用地塞米松干预,通过CCK8法和BCA法测定地塞米松对C2C12细胞增殖和蛋白合成的影响,以划痕实验和Transwell小室观察地塞米松对C2C12细胞修复和迁移能力的影响.②采用Transwell小室将正常肌卫星细胞C2C12(共培养组)和经地塞米松预处理的肌卫星细胞C2C12(预处理组)分别与软骨细胞ATDC5共培养,对照组Transwell下层小室内接种ATDC5细胞、上层小室内为无细胞的常规培养基,采用CCK8法和二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯荧光探针检测ATDC5细胞增殖率和细胞内活性氧含量.结果:①C2C12细胞增殖率和蛋白含量测定结果.地塞米松组C2C12细胞增殖率和蛋白含量均低于对照组[(78.402±5.401)%,(100.000±3.096)%,t=8.498,P=0.000;(5 080.367±296.657)μg·mL-1,(5 775.577±150.476)μg·mL-1=3.620,P=0.022].②C2C12细胞伤口修复率测定结果.地塞米松组C2C12细胞伤口修复率低于对照组[(53.173±1.800)%,(79.979±10.176)%,t=4.493,P=0.011].③C2C12 细胞迁移数量测定结果.培养 24 h和48 h时,地塞米松组C2C12细胞迁移数量均少于对照组[24 h:(24.200±5.630)个,(57.000±2.449)个,t=11.945,P=0.000;48 h:(57.600±8.820)个,(91.000±4.743)个,t=7.457,P=0.000].④ATDC5 细胞增殖率测定结果.3 组 ATDC5 细胞增殖率比较,差异有统计学意义[(100.000±1.663)%,(116.894±7.917)%,(89.130±2.980)%,F=23.700,P=0.001].对照组和共培养组ATDC5细胞增殖率均高于预处理组(P=0.037,P=0.006),共培养组ATDC5细胞增殖率高于对照组(P=0.001).⑤ATDC5细胞内活性氧含量测定结果.3组ATDC5细胞内活性氧含量比较,差异有统计学意义(20.148±5.636,13.959±4.110,40.691±3.146,F=30.096,P=0.001).预处理组ATDC5细胞内活性氧含量高于对照组和共培养组(P=0.001,PP=0.000),对照组和共培养组ATDC5细胞内活性氧含量的差异无统计学意义(P=0.137).结论:地塞米松可抑制肌卫星细胞C2C12增殖,应用地塞米松干预肌卫星细胞C2C12可体外模拟肌肉萎缩条件下肌卫星细胞的生长状态.正常状态下,肌卫星细胞C2C12的代谢产物可促进软骨细胞ATDC5增殖;肌卫星细胞C2C12活力降低,可抑制软骨细胞ATDC5增殖,同时会增加软骨细胞ATDC5氧化性损伤.
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